CN114107457B 向跨膜孔输送分析物的方法 （牛津纳米孔科技公开有限公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN114107457B(45)授权公告日2025.07.08

(21)申请号202111480105.8

(22)申请日2015.10.06

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN114107457A

(43)申请公布日2022.03.01

(30)优先权数据

1418469.12014.10.17GB

(62)分案原申请数据

201580068371.62015.10.06

(73)专利权人牛津纳米孔科技公开有限公司地址英国牛津

(72)发明人克莱夫·布朗

丹尼尔·赖安·加拉尔达

安迪·赫伦丹尼尔·约翰·特纳詹姆斯·怀特

(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所

11105

专利代理师陈钎

(51)Int.CI.

C12Q1/6869(2018.01)

(56)对比文件

CN107002151A,2017.08.01

审查员李雪莹

权利要求书2页说明书44页序列表37页附图10页

(54)发明名称

向跨膜孔输送分析物的方法

(57)摘要

CN114107457

CN114107457B

CN114107457B权利要求书1/2页

2

1.一种向膜中的跨膜孔输送多核苷酸并表征所述多核苷酸的方法，包括：

(a)提供连接到官能化磁性微粒的多核苷酸，所述官能化磁性微粒具有0.1μm至100μm的颗粒尺寸；

(b)在磁场或电场内将所述官能化磁性微粒输送给所述膜，并由此向所述跨膜孔输送所述多核苷酸，其中，所述方法包括使所述官能化磁性微粒(i)沿所述膜移动；或(ii)平行于所述膜移动；

(c)允许所述多核苷酸与所述跨膜孔相互作用，使所述多核苷酸移动穿过所述孔，并使用解旋酶来控制所述多核苷酸穿过所述孔的移动；和

(d)随着所述多核苷酸相对于所述孔移动，获取一个或多个测量值，其中所述测量值代表所述多核苷酸的一个或多个特征，并由此表征所述多核苷酸；

其中所述多核苷酸包含一个或多个能够将所述多核苷酸偶联到所述膜的锚定体并且进一步其中所述多核苷酸穿过所述孔的移动导致所述多核苷酸与所述官能化磁性微粒分离。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法用于向膜中的跨膜孔输送浓度增加的多

核苷酸；

其中，输送给所述跨膜孔的多核苷酸的浓度增加至少10倍。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、20个或更多个、30个或更多个、50个或更多个、100个或更多个、500个或更多个、1,000个或更多个、5,000个或更多个、10,000个或更多个、100,000个或更多个、1,000,000个或更多个或者5,000,000个或更多个多核苷酸连接到所述官能化磁性微粒。

4.根据权利要求1所述的方法，

其中，所述一个或多个能够将所述多核苷酸偶联到所述膜的锚定体包含多肽锚定体和/或疏水锚定体。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述一个或多个锚定体通过杂交连接到所述多核

苷酸。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多核苷酸通过杂交连接到所述微粒。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述跨膜孔是跨膜蛋白孔。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述跨膜蛋白孔衍生自耻垢分枝杆菌孔蛋白(Msp)、α-溶血素(a-HL)或胞溶素。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述跨膜蛋白孔为β-桶孔或α-螺旋束孔。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括从所述膜中移去所述官能化磁性微粒。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述官能化磁性微粒使用磁场或基于流的方法从所述膜中移去。

12.根据权利要求10所述的方法，其中，所述方法包括：

(a)提供连接到第一官能化磁性微粒的在第一样本中的第一多核苷酸；

(b′)将所述第一官能化磁性微粒输送向所述膜，并由此将所述第一多核苷酸输送到所述跨膜孔；

CN114107457B权利要求书2/2页

3

(c)从所述膜移去所述第一官能化磁性微粒；

(d)提供连接到第二官能化磁性微粒的在第二样本中的第二多核苷酸；

(e)将所述第二官能化磁性微粒输送