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莲应对盐胁迫的生理生化响应及CIPK基因克隆与分析

一、引言

1.1研究背景与意义

土壤盐渍化是一个全球性的生态问题，严重影响着农业生产和生态平衡。据联合国教科文组织（UNESCO）和粮农组织（FAO）不完全统计，全世界盐渍土面积约为10亿hm2。在我国，盐碱地面积也相当广阔，且有不断扩大的趋势。盐胁迫会对植物的生长、发育、生理生化过程产生诸多不利影响，导致植物生长受抑、产量降低甚至死亡。据相关研究表明，当土壤含盐量超过0.2%-0.25%时，就会对大多数植物造成危害。

莲（NelumbonuciferaGaertn.）作为一种重要的水生经济植物，不仅具有极高的观赏价值，如“接天莲叶无穷碧，映日荷花别样红”所描绘的美景；还具有重要的食用价值，莲藕可生食、熟食，莲子是上等滋补品；同时在药用方面，莲梗、莲蓬和藕节等均可入药。然而，随着环境的变化和土地利用方式的改变，莲的生长环境也面临着盐胁迫的威胁。研究莲应答盐胁迫的生理生化机制以及相关耐盐基因，对于揭示莲的耐盐性奥秘、培育耐盐莲品种具有重要的理论意义。在农业生产实践中，有助于在盐碱水域地区推广莲的种植，提高土地利用率，增加农民收入；从生态角度而言，能够丰富盐碱水域的植物多样性，改善生态环境，维持生态平衡。

1.2莲的生物学特性及研究现状

莲为睡莲科莲属多年生挺水植物，具有独特的生物学特征。其地下茎为根状茎，即我们常见的莲藕，莲藕有节，节上生根，向下扎根于水底淤泥中，向上抽出叶片和花梗。叶片大而圆，呈盾状，初生叶小，沉于水中称“钱叶”；后生叶较大，浮在水面称“浮叶”；伸出水面的称“立叶”。花大而美丽，有红色、粉红色或白色等多种颜色，花瓣数量较多，通常20片左右，花托呈半球形，所有果实包埋在其中，形成莲蓬，每个莲蓬内有莲子15-25个。

莲性喜温暖多湿、避风向阳、阳光充足的环境，不耐霜冻和干旱，生长适温为23-30℃，对土壤要求以富含有机质的肥沃粘土为宜，适宜的土壤酸碱度为6.5，喜欢相对稳定的静水，一般适宜栽植在池塘，水深为0.3-1.2米。

在对莲的研究方面，目前已取得了一些成果。在形态发育方面，对莲的生长周期、各器官的形态建成等有了较为详细的了解；在遗传育种领域，通过传统杂交育种和现代生物技术相结合的方法，培育出了许多观赏和食用价值更高的新品种；在生理生态研究中，对莲在正常生长环境下的光合特性、水分利用等方面也有了一定的认识。然而，关于莲在盐胁迫下的研究相对较少，主要集中在盐胁迫对莲生长发育、抗氧化系统等生理指标的影响，对于莲应答盐胁迫的分子机制研究还不够深入，尤其是在基因克隆和功能验证方面还有待加强。

1.3盐胁迫对植物的影响及植物耐盐机制

1.3.1盐胁迫对植物的危害

盐胁迫对植物的危害是多方面的，主要体现在以下几个方面：

渗透胁迫：土壤中可溶性盐类过多会导致土壤水势降低，根据水从高水势向低水势流动的原理，植物根系吸水变得困难，甚至植株体内水分有外渗的危险，使植物处于生理干旱状态。一般植物在土壤盐分超过0.2%-0.5%时就会出现吸水困难，当盐分高于0.4%时，植物体内水分易外渗，生长速率显著下降，严重时可导致植物死亡。

离子毒害：盐分过多的土壤环境中某些离子浓度过高，会对植物产生毒害作用。高浓度盐分首先影响原生质膜，改变其透性，致使植物吸收某种盐类过多而排斥了对另一些营养元素的吸收，从而导致植物细胞内部的离子种类和浓度发生变化，造成营养失调，抑制植物生长，同时还会产生单盐毒害作用。例如，当Na?浓度过高时，植物会受到Na?的毒害，减少对K?的吸收，同时也易发生PO?3?和Ca2?的缺乏症。

破坏正常代谢：盐胁迫会影响植物的正常代谢过程。在光合作用方面，盐分过多会使PEP羧化酶和RuBP羧化酶活性降低，叶绿体趋于分解，叶绿素被破坏，叶绿素和类胡萝卜素的生物合成受阻，气孔关闭，从而导致光合速率下降，影响作物产量；在呼吸作用方面，一般低盐时植物呼吸作用受到促进，而高盐时受到抑制，盐分过多时总的趋势是呼吸消耗量多，净光合生产率低，不利于植物生长；在蛋白质合成方面，盐分过多会抑制蛋白质合成，促进其分解，可能是由于破坏了氨基酸的合成，如蚕豆在盐胁迫下叶内半胱氨酸和蛋氨酸合成减少，从而使蛋白质含量减少；此外，盐胁迫使植物体内积累有毒的代谢产物，如蛋白质分解的产物游离的氨基酸、胺、氨等，这些物质对植物有毒害作用，致使植物叶片生长不良，抑制根系生长，组织变黑坏死等。

1.3.2植物耐盐机制概述

植物在长期的进化过程中，形成了一系列复杂的耐盐机制，以应对盐胁迫环境，主要包括以下几个方面：

离子平衡：植物通过调节离子的吸收、运输和区域化分布来维持体内离子平衡。耐盐植物细胞中积累的大部分Na