CN117165721B 一种病毒核酸载体的单颗粒分析方法 （厦门福流生物科技有限公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN117165721B(45)授权公告日2025.07.11

(21)申请号202311004359.1

(22)申请日2023.08.10

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN117165721A

(43)申请公布日2023.12.05

(66)本国优先权数据

202210959623.62022.08.11CN

(73)专利权人厦门福流生物科技有限公司

地址361005福建省厦门市火炬高新区新

科广场5号楼坂上社37-5号1101A室(72)发明人朱少彬田野马玲吴圣福

(74)专利代理机构广东金泰智汇专利商标代理

(51)Int.CI.

C12Q1/70(2006.01)

G01N15/1409(2024.01)

G01N15/1429(2024.01)

G01N15/0205(2024.01)

G01N21/64(2006.01)

C12Q1/68(2018.01)

(56)对比文件

CN119086514A,2024.12.06审查员陈丹

事务所(普通合伙)44721专利代理师林清华

权利要求书14页说明书27页附图13页

(54)发明名称

一种病毒核酸载体的单颗粒分析方法

核酸信号(+)

核酸信号(+)

VSV-G表达信号(+)42.3%

4.5%10?

103

核酸信号(+)

核酸信号(-)

YSV-G表达信号(-)

16.8%

散

荧光通道(计数)

FITC-A

(103)

核酸信号(-)

VSV-G表达信号()

VSV-G表达信号(-)

36.4%

PC5-A荧光通道(计数)CN117165721B(57)摘要本发明涉及一种病毒核酸载体一种或多种指标的检测方法，属于分子生物技术领域。所述方法可选包括制作针对病毒核酸载体的粒径标准曲线和/或浓度标准溶液对其粒径和浓度进行测量；所述方法包括制备针对病毒核酸载体指标中各参数的缀合光学标记试剂的特异性抗靶标试剂；采用流式颗粒检测设备检测样品等步骤；所述方法可以实现对传统方案获得的“病毒滴度”进行更深入的解析，获得更加精确的检测结

PC5-A

荧光通道(计数)

CN117165721B

(57)摘要

CN117165721B权利要求书1/14页

2

1.一种病毒核酸载体的一种或多种指标的检测方法，其包括：

步骤(1):制备针对病毒核酸载体指标中各参数的光学试剂，并将所述光学试剂与含病毒核酸载体的样品混合，使所述光学试剂与病毒核酸载体特异性结合；所述光学试剂包括核酸探针或核酸染料试剂，和选自脂膜染料试剂、或缀合荧光染料的特异性抗靶标试剂中的至少一种，所述参数包括病毒外壳蛋白标志物表达信号和/或病毒囊膜标志物表达信号以及核酸信号；

步骤(2):制备浓度标准溶液，采用流式颗粒检测设备检测所述浓度标准溶液，记录浓度标准溶液的散射光通道和荧光通道检测数据和流式颗粒检测设备的进样流速，对所述含病毒核酸载体的样品溶液颗粒计数浓度进行测量；所述浓度标准溶液和含病毒核酸载体的样品溶液的进样压力和检测时间相同；

步骤(3):采用流式颗粒检测设备检测含病毒核酸载体的样品溶液，记录含病毒核酸载体的样品的散射光通道检测数据和荧光通道检测数据；和

步骤(4):数据分析，计算各指标结果；

其中，所述病毒核酸载体包括逆转录病毒载体、单纯疱疹病毒载体、重组冠状病毒载体；

所述指标包括病毒核酸载体的生物功能性滴度；所述病毒核酸载体的生物功能性滴度包括：含有核酸、病毒外壳和囊膜的病毒核酸载体的滴度、含有核酸和囊膜的病毒核酸载体的滴度、含有核酸和病毒外壳的病毒核酸载体的滴度、空壳体病毒核酸载体的滴度；

所述病毒核酸载体的生物功能性滴度的计算公式为：病毒核酸载体的生物功能性滴度=P×病毒核酸载体中颗粒计数浓度；

其中，P为具有事件阳性信号和待检测生物功能性的阳性信号的颗粒群占所有具有事件阳性信号的颗粒群的颗粒总数的百分比。

2.根据权利要求1所述的检测方法，所述病毒核酸载体包括慢病毒载体。

3.根据权利要求2所述的检测方法，所述步骤(1)的核酸信号包括目标核酸信号。

4.根据权利要求3所述的检测方法，所述指标包括含有目标核酸、病毒外壳和囊膜的病毒核酸载体的滴度、含有目标核酸和囊膜的