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基于微流体脉冲驱动—控制的双通路微量分配系统及实验研究

摘要

随着生物分析技术和高通量筛选技术的飞速发展，生命科学领域对试剂分配的精度和通量提出了更高要求。本文研制了一种基于微流体脉冲驱动—控制技术的双通路微量分配系统，详细阐述了其系统设计，包括硬件电路和软件控制模块。通过实验研究，以甘油溶液等为分配试剂，深入探讨了试剂粘度、微喷嘴出口内径、驱动频率和电压幅值等系统参量对分配量的影响规律。利用该系统按照不同比例分配Na?HPO?-KH?PO?溶液，成功制备出具有pH值梯度的3×3磷酸盐缓冲液微阵列，并加入pH值指示剂检测混合后溶液的酸碱性。实验结果表明，所制备的pH梯度微阵列样点直径相对标准偏差（n=9）为0.8％，样点反应充分、颜色均匀且梯度变化明显。该系统分配精度较高、重复性好，能够实现对不同粘度试剂的自动化、并行及微量（pL级）分配，且无需独立的“反应池”即可实现多种试剂的微量配比及反应，为生命科学研究等领域提供了一种高效、精准的微量分配解决方案。

关键词

微量试剂分配；双通道；微流体脉冲驱动控制技术

一、引言

在蛋白质结晶、药物筛选和基因测序等前沿生命科学研究领域，微量生物试剂快速且精确的分配操作已然成为不可或缺的关键实验手段。实验进程中，常常需要将一种或多种生化试剂按照不同体积精准转移到同一微孔内，以开展后续的反应分析。

近年来，随着生物分析技术的持续革新以及高通量筛选技术的迅猛发展，生命科学实验的通量化要求日益提高。这一趋势直接导致单次实验中试剂用量不断减少，从以往的较大体积逐步减小至纳升乃至皮升水平。与此同时，对试剂分配的速度、精度等方面也提出了更为严苛的要求。在此背景下，开展分配试剂体积微小（纳升乃至皮升量级）、操作速度快捷且分配精度超高的自动化微量分配技术研究，具有极其重要的现实意义。它不仅能够显著提高试剂分配的精度，有效提升分析效率，还能大幅降低昂贵试剂的不必要消耗，从而降低实验成本。更为关键的是，能够极大地缩短试剂间的反应时间，有力地推动生物工程领域实验技术水平迈向新的高度。

当前，自动化微量试剂操作方法主要涵盖接触式和非接触式两种分配方式。接触式分配方法是将喷嘴与微孔板进行直接接触，主要依靠界面力的作用，实现将试剂转移到微孔板内的操作。这种方法具备简单灵活的显著优点，然而，其弊端也不容忽视。在分配过程中，针尖与基板的接触极易带来污染问题，尤其是当分配体积减小至纳升级别时，实现精确分配变得异常困难。非接触式试剂分配方法则截然不同，在该方式下，喷嘴无需与基板进行接触，而是巧妙依靠外力提供足够的能量，使液滴能够成功克服表面张力、粘度等诸多因素的影响，顺利从喷嘴中喷出。相较于接触式分配方法，非接触式分配方法优势明显，其分配速度更快，有效避免了污染问题，并且能够实现更小体积试剂的分配，因而得到了极为广泛的应用，现已成为微量生物试剂分配的主流方式。目前，非接触式微量分配技术依据驱动原理的差异，主要可划分为容积式压电驱动、热泡式驱动、气体压力直接驱动式等多种驱动类型。容积式压电驱动是利用压电陶瓷在电压脉冲作用下产生变形，进而使腔体体积发生变化，通过挤压试剂实现从喷嘴喷出的效果。这种驱动方式响应速度快、频响范围宽，分配体积能够达到皮升级别。但不可否认的是，压电式喷头结构复杂，造价高昂，且不易进行拆卸与维修，一旦喷嘴发生堵塞，将会造成较大的经济损失。热气泡式喷射技术的驱动原理相对简单易行，并且能够实现喷嘴阵列的高密度集成。然而，该技术在喷射过程中需要进行加热操作，这无疑会对生物样品的活性产生不利影响。气体压力直接驱动方式具有结构简单、适用性广泛的优点，能够在较高温度环境下正常工作。但是，随着液体腔液面逐渐下降，会出现喷射不稳定的现象，导致液滴的可控性较差。

微流体脉冲驱动控制技术，也被称为微流体数字化技术，能够通过简洁的无热源、无阀的微分配系统，出色满足试剂的微量（皮升级）分配需求。为有效解决现有微量试剂分配技术中存在的诸多问题，本研究精心研制了基于微流体脉冲驱动控制技术的精确分配系统。该系统不仅能够实现微量试剂的双通道并行分配，还具备自动化分配功能。通过深入研究多种参数对分配量的影响，并对磷酸盐缓冲液（Na?HPO?-KH?PO?）进行不同比例的混合及反应，成功制备出pH梯度溶液微阵列，为相关领域的研究提供了全新的技术手段和解决方案。

二、基于微流体脉冲-驱动控制技术的双通路微分配系统设计

微流体脉冲驱动控制技术以脉冲惯性力作为液体喷射的主动力，其中脉冲惯性力可以通过各种撞击、振动等方式产生。由于压电器件产生脉冲惯性力的方式具有响应频率高、电压位移动态响应好等特点，因此本研究采用压电致动器作为动力源，产生微流体脉冲惯性力。微流体脉冲驱动控制系统参量包括：驱动电压波形