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基于miR-132-3p调控的芝麻酚对氟化物诱导小鼠认知障碍改善机制研究及新型保健产品开发

摘要

本研究旨在探讨基于miR-132-3p调控的芝麻酚对氟化物诱导小鼠认知障碍的改善机制，并基于此研究成果开发新型保健产品。通过构建氟化物诱导的小鼠认知障碍模型，运用分子生物学、神经行为学等多种技术手段，研究芝麻酚对miR-132-3p表达的影响以及其改善认知障碍的具体机制。在此基础上，结合现代保健产品开发理念，进行新型保健产品的设计与开发。研究结果为芝麻酚在改善认知障碍方面的应用提供了理论依据，也为新型保健产品的研发开辟了新途径。

关键词

miR-132-3p；芝麻酚；氟化物；认知障碍；改善机制；保健产品开发

一、引言

1.1认知障碍的现状与危害

认知障碍是一种严重影响人类健康和生活质量的神经系统疾病，其主要表现为记忆力减退、注意力不集中、语言表达障碍等。随着人口老龄化的加剧，认知障碍的发病率呈逐年上升趋势，给社会和家庭带来了沉重的负担。氟化物是一种常见的环境污染物，长期摄入过量的氟化物会对神经系统造成损害，导致认知障碍的发生。因此，寻找有效的方法来改善氟化物诱导的认知障碍具有重要的现实意义。

1.2miR-132-3p与认知障碍的关系

miR-132-3p是一种微小RNA，在神经系统的发育和功能维持中发挥着重要作用。研究表明，miR-132-3p的表达异常与多种神经系统疾病，包括认知障碍密切相关。它可以通过调控靶基因的表达，影响神经细胞的增殖、分化、凋亡等过程，进而影响认知功能。因此，miR-132-3p有望成为治疗认知障碍的新靶点。

1.3芝麻酚的生物学活性

芝麻酚是芝麻中的一种天然活性成分，具有抗氧化、抗炎、神经保护等多种生物学活性。近年来的研究发现，芝麻酚对神经系统具有一定的保护作用，能够改善神经损伤引起的认知障碍。然而，芝麻酚改善认知障碍的具体机制尚不清楚，尤其是其与miR-132-3p之间的关系还需要进一步研究。

1.4研究目的与意义

本研究旨在探讨基于miR-132-3p调控的芝麻酚对氟化物诱导小鼠认知障碍的改善机制，并基于此研究成果开发新型保健产品。通过本研究，有望揭示芝麻酚改善认知障碍的分子机制，为认知障碍的治疗提供新的理论依据和治疗策略。同时，开发新型保健产品可以为人们提供一种安全、有效的预防和改善认知障碍的方法，具有重要的社会和经济意义。

二、材料与方法

2.1实验动物

选用健康的雄性昆明小鼠，体重20-25g，购自[动物供应商名称]。小鼠饲养于温度（22±2）℃、湿度（50±5）%的环境中，自由饮食和饮水，适应环境1周后进行实验。

2.2主要试剂与仪器

芝麻酚（纯度≥98%）购自[试剂供应商名称]；氟化钠（分析纯）购自[试剂供应商名称]；miR-132-3p模拟物、抑制剂及阴性对照购自[生物公司名称]；RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒购自[生物公司名称]；蛋白质提取试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒、Westernblot相关试剂购自[生物公司名称]；Morris水迷宫实验系统购自[仪器供应商名称]。

2.3实验分组与处理

将小鼠随机分为5组，每组10只：正常对照组、氟化物模型组、芝麻酚低剂量组、芝麻酚高剂量组和miR-132-3p抑制剂组。正常对照组小鼠饮用去离子水；氟化物模型组小鼠饮用含100mg/L氟化钠的去离子水；芝麻酚低剂量组和高剂量组小鼠在饮用含100mg/L氟化钠的去离子水的同时，分别灌胃给予芝麻酚10mg/kg和20mg/kg；miR-132-3p抑制剂组小鼠在饮用含100mg/L氟化钠的去离子水的同时，侧脑室注射miR-132-3p抑制剂。实验周期为8周。

2.4神经行为学检测

在实验结束前1周，采用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知功能。实验包括定位航行实验和空间探索实验两个阶段。定位航行实验连续进行4天，记录小鼠找到隐藏平台的潜伏期；空间探索实验在定位航行实验结束后的第5天进行，记录小鼠在目标象限的停留时间和穿越平台的次数。

2.5分子生物学检测

2.5.1RNA提取与荧光定量PCR

实验结束后，处死小鼠，取脑组织，采用RNA提取试剂盒提取总RNA。将RNA反转录为cDNA，然后进行荧光定量PCR检测miR-132-3p的表达水平。以U6为内参，采用2-ΔΔCt法计算miR-132-3p的相对表达量。

2.5.2蛋白质提取与Westernblot

取脑组织，采用蛋白质提取试剂盒提取总蛋白，用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。取等量的蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，然后将蛋白转移至PVDF膜上。用5