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一例犊牛轮状病毒和冠状病毒混合感染的诊疗

一、病例概述

1.病例来源及背景

(1)本病例来源于我国某规模化奶牛场，该场于2023年春季开始出现犊牛腹泻症状，病情迅速蔓延，给养殖户带来了巨大的经济损失。据初步统计，此次疫情共涉及犊牛300余头，其中死亡犊牛80头，发病率约为27%，死亡率约为26.7%。通过对病例的流行病学调查，发现该场在疫情爆发前一个月内，曾从外地引进了一批成年奶牛，这批奶牛中部分存在腹泻症状，但未及时隔离治疗。

(2)病例背景方面，该奶牛场位于我国北方地区，气候寒冷，饲料来源单一，主要以玉米、豆粕等谷物饲料为主。近年来，随着养殖规模的扩大，饲养密度逐渐增加，生物安全措施未能得到有效落实。此外，饲养管理过程中存在一定的疏忽，如饲料储存不当、环境卫生差等问题，为病原微生物的传播提供了条件。在此次疫情爆发前，该场曾进行过疫苗接种，但疫苗种类和接种时间与此次疫情病原不符。

(3)结合病例背景，分析此次犊牛腹泻疫情可能与以下因素有关：一是病原微生物的入侵，特别是轮状病毒和冠状病毒的混合感染；二是饲养管理不当，如饲料质量不合格、环境卫生差、饲养密度过大等；三是生物安全措施不到位，如外来奶牛的引入未进行严格检疫、隔离等。针对此次疫情，养殖户采取了积极的防控措施，包括隔离病牛、加强饲养管理、环境消毒等，但由于疫情爆发初期未能及时确诊，导致病情进一步恶化，给养殖户带来了严重的经济损失。

2.病例主要症状

(1)病牛主要表现为急性腹泻，粪便呈水样，颜色从黄色到绿色不等，伴有恶臭。病牛食欲下降，精神萎靡，呼吸加快，体温在38.5-40.5摄氏度之间波动。部分病牛出现呕吐现象，呕吐物为未消化的饲料和胃液混合物。病程一般为3-5天，严重病例可在24小时内出现脱水、休克等症状。

(2)在病牛群体中，症状表现存在一定差异。轻症病例仅表现为轻微腹泻，食欲略有减少；而重症病例则出现严重脱水、休克，甚至死亡。部分病牛伴有呼吸道症状，如咳嗽、流鼻涕等。此外，病牛皮肤弹性降低，可视黏膜苍白，部分病例出现关节肿胀、跋行等症状。

(3)部分病牛在发病初期表现为发热，体温升高至40摄氏度以上，随后出现腹泻症状。少数病例在发病过程中出现神经症状，如抽搐、角弓反张等。在整个病程中，病牛的生长发育受到严重影响，生长发育迟缓，体重下降明显。

3.病例流行病学调查

(1)流行病学调查发现，此次犊牛腹泻疫情发生在2023年3月至4月期间，共涉及300余头犊牛。疫情爆发初期，病牛主要集中在奶牛场的犊牛舍，随后迅速蔓延至其他区域。通过对病牛舍和周边环境的调查，发现病牛舍内饲养密度较高，每平方米约3头犊牛，环境湿度在75%以上，通风不良。此外，病牛舍内存在多处粪便堆积，未及时清理，为病原微生物的传播提供了条件。

(2)在疫情爆发前一个月，该奶牛场从外地引进了50头成年奶牛，其中10头奶牛在运输过程中出现腹泻症状，但未进行隔离治疗。引进的奶牛在隔离观察期间，与犊牛舍内的犊牛接触频繁，导致病原体传播。调查发现，引进奶牛的腹泻症状与犊牛腹泻症状相似，经实验室检测，均为轮状病毒和冠状病毒混合感染。此次疫情爆发与引进奶牛直接相关，是导致犊牛腹泻疫情的主要原因。

(3)在疫情爆发期间，奶牛场采取了严格的隔离措施，将病牛与健康犊牛分开饲养，并对病牛舍进行彻底消毒。同时，对全场奶牛进行流行病学调查，发现部分奶牛存在隐性感染。调查数据显示，隐性感染奶牛的比例约为15%，这些奶牛在无临床症状的情况下，仍能排出病毒，成为传播源。此外，调查还发现，病牛舍内的饲养员在疫情爆发期间，曾出现轻微腹泻症状，但未引起重视。这些因素共同导致了疫情的蔓延。

二、病原学检测

1.病毒分离与鉴定

(1)病毒分离与鉴定工作首先在病牛的粪便、呕吐物以及肠道内容物中进行。采用组织培养法，将病料接种于细胞培养瓶中的MDCK细胞，观察细胞病变情况。结果显示，接种病料的细胞在接种后24-48小时内出现明显的细胞圆化、脱落和细胞病变现象，提示病毒存在。

(2)为了进一步鉴定病毒种类，对分离得到的病毒进行了形态学观察。使用电子显微镜观察病毒颗粒，结果显示病毒颗粒呈球形，直径约100-200纳米，符合轮状病毒和冠状病毒的特征。随后，通过病毒颗粒的RNA聚合酶基因和外壳蛋白基因进行分子生物学鉴定，结果证实分离病毒为轮状病毒和冠状病毒的混合感染。

(3)为了明确病毒分离株的致病性，将分离株接种于健康犊牛，观察其临床表现。结果显示，接种分离株的犊牛在24小时内出现腹泻症状，粪便呈水样，且伴有呕吐、精神萎靡等症状。与自然感染病例表现一致，证实了分离株的致病性。此外，通过交叉中和试验，进一步确认了分离株的病毒种类，为后续的治疗和防控提供了重要依据。

2.抗原检测

(1)在