二化螟和县种群Cry1Ab抗性基因剖析及对Cry1A敏感性研究.docxVIP

二化螟和县种群Cry1Ab抗性基因剖析及对Cry1A敏感性研究

一、引言

1.1研究背景与意义

二化螟（Chilosuppressalis）作为一种极具破坏力的多食性害虫，在全球范围内对水稻、小麦、玉米等多种农作物造成了严重的危害。据统计，在我国部分地区，二化螟的爆发可导致水稻减产20%-50%，严重时甚至绝收。其幼虫主要蛀食水稻茎秆，在水稻分蘖期造成枯鞘、枯心苗；穗期则导致虫伤株和白穗，极大地影响了农作物的产量与质量，对农业生产构成了严重威胁。

苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis，简称Bt）产生的Bt毒素，因其对多种害虫具有特异性毒杀作用，且对人畜安全、环境友好，在害虫防治领域得到了广泛应用。尤其是转基因抗虫作物的推广，如转Bt基因水稻，在有效控制二化螟等鳞翅目害虫方面发挥了重要作用，显著减少了化学农药的使用量，降低了农业生产成本，同时也减轻了化学农药对环境的污染。

然而，随着Bt毒素的长期和广泛使用，害虫对Bt毒素的抗性问题日益凸显。害虫对Bt毒素产生抗性后，不仅会导致Bt毒素的防治效果大幅下降，使得农作物再次面临害虫侵害的风险，而且为了控制害虫，可能不得不重新增加化学农药的使用，这将对生态环境和人类健康产生潜在危害。因此，深入研究害虫对Bt毒素的抗性机制，准确监测抗性基因的频率变化以及田间种群对Bt毒素的敏感性，对于制定科学有效的害虫抗性治理策略、保障农业的可持续发展具有至关重要的意义。

本研究聚焦于二化螟和县种群对Cry1Ab抗性基因的起始频率及田间种群对Cry1A的敏感性调查，旨在为该地区二化螟的科学防控提供关键的数据支持和理论依据，为延缓害虫对Bt毒素抗性的发展、保障农业生产安全贡献力量。

1.2国内外研究现状

二化螟在全球范围内分布广泛，亚洲、欧洲、非洲等多个地区均有其踪迹，在我国各稻区也均有分布，且以长江流域及以南稻区发生较为严重。近年来，随着气候变化、种植结构调整以及耕作制度的改变，二化螟的发生危害呈现出加重的趋势。其发生代数因地区而异，北方稻区一年发生1-2代，南方稻区可达4-5代。在防治方面，传统的化学防治由于长期依赖化学农药，导致二化螟对多种农药产生了不同程度的抗性，防治效果逐渐下降。生物防治作为一种绿色环保的防治手段，利用天敌昆虫（如稻赤眼蜂、姬蜂等）以及微生物农药（如苏云金芽孢杆菌）来控制二化螟的种群数量，受到了越来越多的关注。物理防治则主要通过灯光诱捕、性诱剂诱杀等方法，减少二化螟成虫的交配和繁殖机会。农业防治通过合理密植、科学施肥、及时清理田园等措施，创造不利于二化螟生存和繁殖的环境。

苏云金芽孢杆菌的研究最早可追溯到20世纪初，随着研究的不断深入，其在害虫防治领域的应用越来越广泛。苏云金芽孢杆菌能够产生多种类型的毒素，其中杀虫晶体蛋白（ICP）是其主要的杀虫活性成分。ICP根据氨基酸序列的同源性和杀虫谱的差异，可分为多个家族，如Cry1、Cry2、Cry3等。不同家族的ICP对不同昆虫具有特异性的毒杀作用，例如Cry1主要针对鳞翅目害虫，Cry3主要针对鞘翅目害虫。在应用方面，苏云金芽孢杆菌不仅被直接制成微生物农药用于田间喷雾防治害虫，其杀虫基因还被成功转入多种农作物中，培育出了一系列抗虫转基因作物，如转Bt基因玉米、棉花和水稻等，这些转基因作物在全球范围内的种植面积逐年增加，有效降低了害虫的危害程度。

关于害虫对Bt毒素抗性的研究，自20世纪80年代首次报道小菜蛾对Bt毒素产生抗性以来，越来越多的害虫被发现对Bt毒素产生了抗性。研究表明，害虫对Bt毒素产生抗性的机制是多方面的，包括中肠受体的改变、代谢酶活性的变化、细胞解毒机制的增强以及基因表达调控的改变等。其中，中肠受体的改变是最为重要的抗性机制之一，例如害虫中肠上皮细胞表面的钙黏蛋白（Cadherin）、氨肽酶N（APN）等受体与Bt毒素的结合能力下降，导致Bt毒素无法正常发挥作用。此外，代谢酶活性的变化，如细胞色素P450酶系、谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）等的活性增强，能够加速Bt毒素的代谢和解毒，从而使害虫产生抗性。

1.3研究目标与内容

本研究的目标在于精确测定二化螟和县种群中Cry1Ab抗性基因的起始频率，深入了解该种群对Cry1A的敏感性现状，为后续制定科学合理的害虫防治策略提供坚实的数据基础。

为实现上述目标，具体研究内容包括：其一，从和县田间采集二化螟样本，运用分子生物学技术，如PCR扩增和基因测序，精准鉴定二化螟个体的基因型，从而准确计算出Cry1Ab抗性基因的起始频率；其二，通过生物测定实验，采用标准的饲料混毒