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解析小菜蛾氨肽酶N2与ABC转运蛋白C2在Cry1Ac抗性中的关键作用

一、引言

1.1研究背景与意义

小菜蛾（Plutellaxylostella），属鳞翅目菜蛾科，是一种世界性的十字花科蔬菜和作物的重大农业害虫。因其繁殖能力强、世代周期短以及适应能力卓越，小菜蛾的危害范围极为广泛。据统计，每年小菜蛾在全球范围内给农业生产带来的经济损失高达40亿-50亿美元，严重威胁着十字花科蔬菜和作物的产量与质量安全。在中国，十字花科蔬菜种植面积广阔，小菜蛾的危害也相当严重，给菜农造成了巨大的经济损失。

长期以来，化学农药一直是防治小菜蛾的主要手段。然而，由于化学农药的不合理使用，小菜蛾对多种化学杀虫剂产生了不同程度的抗药性。例如，有机磷类、拟除虫菊酯类和氨基甲酸酯类等传统化学农药，在长期使用后对小菜蛾的防治效果逐渐降低。这种抗药性的产生不仅增加了防治成本，还导致化学农药的使用量不断加大，进而引发了环境污染、农产品质量下降以及非靶标生物受到影响等一系列问题。

苏云金芽胞杆菌（Bt）制剂作为一种生物杀虫剂，因其具有靶标特异、环境友好以及对非靶标生物安全等优点，在农业生产中得到了广泛的应用。Bt产生的杀虫蛋白，如Cry1Ac等，可以特异性地与昆虫中肠上皮细胞表面的受体结合，形成离子通道，破坏细胞的正常生理功能，最终导致昆虫死亡。基于Bt杀虫蛋白的生物杀虫剂及转基因作物在全球农业生产中发挥了重要作用，有效地控制了多种农业害虫的危害。

随着Bt生物杀虫剂和转Bt基因抗虫作物的大面积使用与推广，害虫对Bt快速进化产生抗药性，这已成为制约Bt生物技术产品可持续发展的关键问题。据报道，全世界至少已经有9种重大农业害虫在田间对Bt生物杀虫剂和转Bt基因抗虫作物产生了高抗性。小菜蛾是最早在田间被报道对Bt生物杀虫剂产生抗药性的农业害虫，其对Bt的抗性问题尤为突出。一旦小菜蛾对Bt产生抗性，Bt制剂和转基因作物的防治效果将大打折扣，从而导致小菜蛾的危害再次加剧，这将对农业生产和生态环境造成严重的影响。

深入研究小菜蛾对Cry1Ac的抗性机制具有重要的理论和实践意义。从理论层面来看，这有助于我们深入了解昆虫与Bt杀虫蛋白之间的相互作用关系，揭示害虫抗性进化的分子机制，丰富昆虫毒理学和进化生物学的理论知识。通过研究小菜蛾对Cry1Ac的抗性机制，我们可以进一步明确Bt杀虫蛋白的作用靶点和作用方式，以及昆虫在长期进化过程中对Bt产生抗性的适应性策略。从实践角度出发，对小菜蛾抗性机制的研究成果可以为制定更加有效的害虫防治策略提供科学依据，有助于延缓害虫对Bt的抗性发展，延长Bt生物技术产品的使用寿命，从而保障农业生产的可持续发展。我们可以根据抗性机制开发新的Bt制剂或转基因作物，或者设计合理的用药方案，以减少害虫抗性的产生，提高防治效果。

1.2小菜蛾对Cry1Ac抗性研究现状

小菜蛾对Cry1Ac产生抗性的研究已经取得了一定的进展。目前的研究表明，小菜蛾对Cry1Ac的抗性与多个因素有关，其中中肠受体的变化被认为是导致抗性产生的重要原因之一。

在众多可能的中肠受体中，氨肽酶N（APN）和ABC转运蛋白被广泛研究。氨肽酶N是一类锌离子依赖的外切蛋白酶，在昆虫中肠中大量存在。研究发现，小菜蛾中肠中的氨肽酶N2可能与Cry1Ac的结合和毒性发挥密切相关。一些研究表明，在Cry1Ac敏感的小菜蛾种群中，氨肽酶N2能够与Cry1Ac特异性结合，这种结合是Cry1Ac发挥毒性作用的关键步骤。而在抗性种群中，氨肽酶N2的基因表达水平、蛋白结构或与Cry1Ac的结合能力可能发生了改变，从而影响了Cry1Ac的杀虫效果。例如，有研究通过基因表达分析发现，抗性小菜蛾种群中氨肽酶N2的表达量显著低于敏感种群，这可能导致Cry1Ac无法有效地与氨肽酶N2结合，进而降低了其对小菜蛾的毒性。然而，目前关于氨肽酶N2在小菜蛾对Cry1Ac抗性中的具体作用机制仍存在许多未知之处，例如氨肽酶N2与Cry1Ac结合后如何引发后续的细胞毒性反应，以及氨肽酶N2的结构变化如何影响其与Cry1Ac的相互作用等问题，都有待进一步深入研究。

ABC转运蛋白是一类广泛存在于生物膜上的跨膜蛋白，能够利用ATP水解产生的能量将多种物质跨膜运输。在小菜蛾中，ABC转运蛋白C2（ABCC2）也被认为是Cry1Ac的潜在受体之一。ABCC2在小菜蛾中肠上皮细胞的细胞膜上表达，其结构和功能的变化可能影响Cry1Ac的进入和作用效果。已有研究利用基因编辑技术，如CRISPR/Cas9，对小菜蛾的ABCC2基