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臭椿皮及香椿皮体外抑菌活性测定

一、实验材料

1.臭椿皮和香椿皮的采集与制备

臭椿皮，学名Ailanthusaltissima，是我国广泛分布的一种落叶乔木，其树皮具有丰富的药用价值。在采集臭椿皮的过程中，我们选取了生长年限在20年以上的健康树木，确保树皮中有效成分的含量。采集时间选择在春季，此时树皮中的有效成分含量较高。具体操作为：使用锋利的刀具沿着树干向上切割，直至树皮与木质部完全分离。采集到的臭椿皮需立即清洗干净，以去除表面的杂质和泥土。清洗后，将臭椿皮晾晒在通风干燥处，待其自然晾干至一定程度后，进行粉碎处理。实验中，我们共采集了5公斤臭椿皮，经过晾晒和粉碎后，得到约1.5公斤的臭椿皮粉末。根据相关文献报道，臭椿皮中的有效成分主要包括苦味素、生物碱、黄酮类化合物等，这些成分具有显著的抗菌、抗炎、抗氧化等生物活性。

香椿皮，学名Toonasinensis，同样是一种具有丰富药用价值的植物。在采集香椿皮时，我们选取了生长在阳光充足、土壤肥沃的地区的成年香椿树。采集时间同样选择在春季，此时香椿皮中的有效成分含量较高。采集方法与臭椿皮相似，使用刀具沿着树干向上切割，直至树皮与木质部完全分离。采集到的香椿皮同样需要立即清洗干净，去除表面的杂质和泥土。清洗后，将香椿皮晾晒在通风干燥处，待其自然晾干至一定程度后，进行粉碎处理。实验中，我们共采集了4公斤香椿皮，经过晾晒和粉碎后，得到约1.2公斤的香椿皮粉末。研究表明，香椿皮中含有多种生物活性成分，如挥发油、香豆素、香叶醇等，这些成分对多种细菌和真菌具有抑制作用。

在制备臭椿皮和香椿皮提取物时，我们采用传统的溶剂提取法。首先，将晾晒干燥后的臭椿皮和香椿皮粉末分别用80%乙醇溶液进行浸泡，浸泡时间为24小时。浸泡过程中，需不断搅拌以充分提取有效成分。浸泡完成后，将混合液进行过滤，得到滤液。然后，将滤液在50℃下进行减压浓缩，直至浓缩至一定浓度。根据实验需要，将浓缩液进一步稀释至所需浓度。在实验过程中，我们分别制备了不同浓度的臭椿皮和香椿皮提取物，以便进行后续的抑菌活性测定。例如，我们制备了0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、5mg/mL四个浓度的臭椿皮提取物，以及0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、5mg/mL四个浓度的香椿皮提取物。通过对比不同浓度下的抑菌效果，我们可以更好地了解两种皮质的抑菌活性。

2.抑菌活性测试菌株的选择与培养

(1)在抑菌活性测试中，我们选择了金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、大肠杆菌（Escherichiacoli）和白色念珠菌（Candidaalbicans）作为测试菌株。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是常见的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，而白色念珠菌则是一种常见的真菌。这些菌株在临床感染中非常常见，因此选择它们作为测试菌株具有实际意义。金黄色葡萄球菌对多种抗生素具有耐药性，而大肠杆菌则与腹泻等疾病相关。白色念珠菌则常引起阴道炎、口腔炎等真菌感染。

(2)菌株的培养过程严格按照实验室规范进行。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在MHB（Mueller-HintonBroth）培养基中进行培养，白色念珠菌则在SDA（SabouraudDextroseAgar）培养基中进行培养。培养温度分别为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌37℃，白色念珠菌25℃。培养时间为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌24小时，白色念珠菌48小时。在培养过程中，我们观察菌株的生长情况，确保其生长良好。例如，金黄色葡萄球菌在MHB培养基中培养24小时后，菌落呈金黄色，生长旺盛；大肠杆菌在MHB培养基中培养24小时后，菌落呈红色，生长均匀；白色念珠菌在SDA培养基中培养48小时后，菌落呈白色，呈绒毛状。

(3)为了确保测试结果的准确性，我们对菌株进行了一系列鉴定和纯化。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌通过革兰氏染色、氧化酶试验和触酶试验进行鉴定。白色念珠菌则通过芽管形成试验和核糖核酸酶试验进行鉴定。通过这些鉴定方法，我们确保了所使用的菌株为纯净菌株。在纯化过程中，我们对菌株进行多次划线分离，以确保其纯度。例如，金黄色葡萄球菌经过3次划线分离后，得到纯菌株；大肠杆菌经过2次划线分离后，得到纯菌株；白色念珠菌经过4次划线分离后，得到纯菌株。这些纯化后的菌株用于后续的抑菌活性测试。

3.实验试剂与仪器

(1)实验试剂方面，我们使用了多种化学试剂和生物试剂。化学试剂包括氯化钠、氢氧化钠、盐酸、硫酸铜等，这些试剂用于配制培养基和调节pH值。生物试剂包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等测试菌株，以及用于提取臭椿皮和香椿皮有效成分的乙醇、丙酮等有机溶剂。此外，我们还使用了琼脂、葡萄糖、酵母提取物等，这些试剂在制备培养基时发挥着重要