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CD137-CD137L轴干预对ApoE-/-小鼠NFATc1表达调控机制研究

一、引言

1.1研究背景

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）作为一种慢性炎症性疾病，是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因，严重威胁着人类的健康。据统计，动脉粥样硬化导致的心脑血管疾病死亡率在全球范围内居高不下，给社会和家庭带来了沉重的负担。其发病机制复杂，涉及脂质代谢紊乱、炎症反应、免疫调节异常等多个方面，目前尚未完全阐明。

ApoE-/-小鼠由于载脂蛋白E基因缺失，导致胆固醇代谢异常，可自发形成高胆固醇血症，并在正常饮食条件下发生显著的动脉粥样硬化病变，其病变部位和发展过程与人类动脉粥样硬化有一定的相似性，因此被广泛用作研究动脉粥样硬化发病机制和治疗策略的动物模型。通过对ApoE-/-小鼠的研究，能够深入了解动脉粥样硬化的发生发展过程，为寻找有效的治疗靶点和干预措施提供重要的实验依据。

CD137（4-1BB）属于肿瘤坏死因子受体超家族成员，CD137L（4-1BBL）是其配体，二者组成的CD137-CD137L轴在免疫调节中发挥着关键作用。在T细胞活化过程中，CD137与CD137L结合，提供共刺激信号，促进T细胞的增殖、分化和细胞因子的分泌，增强机体的免疫应答。此外，CD137-CD137L轴还参与了天然免疫细胞如树突状细胞、巨噬细胞等的功能调节，在抗感染免疫、肿瘤免疫等方面都有着重要的作用。研究表明，CD137在人类动脉粥样硬化斑块中表达上调，且与斑块的炎症程度相关，提示CD137-CD137L轴可能参与了动脉粥样硬化的发病过程。

NFATc1（活化T细胞核因子胞浆1型）是NFAT家族中的重要成员，在免疫细胞的活化、分化和功能调节中扮演着关键角色。当T细胞受到抗原刺激后，细胞内钙离子浓度升高，激活钙调神经磷酸酶，使NFATc1去磷酸化，从而从细胞质转移到细胞核内，与其他转录因子协同作用，调节一系列细胞因子和基因的表达，参与免疫应答的调控。在动脉粥样硬化的发生发展过程中，NFATc1的异常表达与炎症反应、血管平滑肌细胞增殖和迁移等密切相关。

鉴于CD137-CD137L轴和NFATc1在免疫调节和动脉粥样硬化发病机制中的重要作用，探讨干预CD137-CD137L轴对ApoE-/-小鼠NFATc1表达的影响，对于深入揭示动脉粥样硬化的发病机制，寻找新的治疗靶点具有重要的理论和现实意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在探究干预CD137-CD137L轴对ApoE-/-小鼠NFATc1表达的影响，并进一步探讨其相关机制。通过体内和体外实验，观察刺激或阻断CD137-CD137L轴后，ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块中以及淋巴细胞内NFATc1表达水平的变化，为深入理解动脉粥样硬化的发病机制提供新的理论依据。

从理论意义来看，本研究有助于揭示CD137-CD137L轴与NFATc1之间的调控关系，丰富对免疫调节网络在动脉粥样硬化发病中作用的认识，填补相关领域在机制研究方面的部分空白，为后续的研究提供重要的理论基础。从实际应用价值而言，若能明确CD137-CD137L轴对NFATc1表达的影响机制，可能为动脉粥样硬化等心血管疾病的治疗提供新的靶点和治疗策略。通过干预CD137-CD137L轴，调节NFATc1的表达，有望抑制动脉粥样硬化的发展，降低心血管疾病的发生率和死亡率，改善患者的预后和生活质量。此外，本研究结果也可能为其他涉及免疫调节异常的疾病治疗提供新的思路和借鉴。

1.3研究方法与创新点

本研究选取6-8周龄的雄性ApoE-/-小鼠作为实验动物，将其随机分为对照组、刺激组和阻断组。采用颈动脉硅胶圈植入法建立ApoE-/-小鼠动脉粥样斑块模型，以模拟人类动脉粥样硬化的病理过程。刺激组给予anti-CD137特异性刺激CD137-CD137L轴，阻断组给予Anti-CD137L特异性阻断CD137-CD137L轴，对照组给予等量的生理盐水。

通过免疫组织化学方法检测小鼠颈动脉斑块中NFATc1的表达，观察其在组织中的定位和分布情况；运用流式细胞术分析脾脏淋巴细胞中NFATc1的表达水平，准确量化细胞内NFATc1的含量；采用RT-PCR技术检测体外培养的小鼠淋巴细胞NFATc1mRNA的表达，从基因转录水平探究其变化规律；使用Westernblot技术检测NFATc1蛋白的表达，进一步验证其在蛋白水平的改变。最后，对实验数据进行统