NYT 2688-202X 柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测技术规程标准立项修订与发展报告.docx

《NY/T2688-202X柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测技术规程》修订与发展报告

EnglishTitle:DevelopmentReportontheRevisionof“TechnicalCodeofPracticeforReal-timeFluorescentQuantitativePCRDetectionof*Candidatus*Liberibacterasiaticus”

摘要

柑橘黄龙病（Huanglongbing,HLB）是柑橘生产上最具毁灭性的病害，被称为柑橘产业的“癌症”。其病原菌（*Candidatus*Liberibacterasiaticus*）难以培养，早期症状隐蔽，精准、灵敏的检测技术是实施有效监测与防控的前提。实时荧光定量PCR（qPCR）技术因其高特异性、高灵敏度及定量能力，已成为国内外HLB检测的核心手段。原农业行业标准《NY/T2688-2015柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测方法》自发布以来，为我国的HLB监测防控提供了重要技术支撑。然而，随着分子生物学技术的飞速发展，新的、灵敏度更高的检测靶点与引物探针体系不断涌现，原标准中的部分技术参数已显滞后，难以满足当前对病害早期诊断、低菌量样本精准检出的迫切需求。本报告旨在系统阐述《NY/T2688-202X柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测技术规程》的修订背景、核心内容与技术革新。本次修订在继承原标准可靠技术路线的基础上，重点更新了检测引物探针体系，优化了样本采集与核酸提取流程，并规范了相关术语。修订后的标准将显著提升对柑橘植株及传毒媒介柑橘木虱中黄龙病菌亚洲种的检测灵敏度与准确性，为科学评估病原菌载量、实施分区精准防控、保障我国柑橘产业安全与可持续发展提供更为先进、统一的技术规范。

关键词：柑橘黄龙病；实时荧光定量PCR；技术规程；标准修订；病原检测；植物检疫

Keywords:CitrusHuanglongbing;Real-timeFluorescentQuantitativePCR;TechnicalCodeofPractice;StandardRevision;PathogenDetection;PlantQuarantine

正文

1.修订背景与目的意义

柑橘黄龙病是由韧皮部杆菌属（*Candidatus*Liberibacter）细菌引起的一种全球性柑橘毁灭性病害。我国主要流行其亚洲种（*Candidatus*Liberibacterasiaticus*）。该病通过嫁接和媒介昆虫柑橘木虱（*Diaphorinacitri*）传播，染病后导致柑橘树势衰退、果实畸形变质，最终整株死亡，对柑橘产业构成严重威胁。鉴于病原菌的不可培养特性，分子检测技术，尤其是实时荧光定量PCR（qPCR），因其能在数小时内实现对病原核酸的高通量、高特异性及定量检测，已成为国内外HLB诊断、疫情监测和种苗检疫的核心技术。

原农业行业标准《NY/T2688-2015柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测方法》的实施，首次在全国范围内统一了HLB的qPCR检测技术，为病害的科学防控奠定了坚实基础。然而，标准化的技术文件需与科技发展同步迭代。近年来，针对HLB病原菌的分子生物学研究不断深入，多个研究团队基于全基因组数据，开发出了针对不同保守基因（如16SrDNA、核糖体蛋白基因、膜蛋白基因等）的新型引物与探针。这些新体系相较于原标准采用的引物，在检测灵敏度、特异性及对抑制剂耐受性方面展现出更优的性能。特别是在检测潜伏感染期植株、冬季低菌量样本或单个柑橘木虱媒介时，灵敏度更高的检测方法对于实现“早发现、早处置”的防控目标至关重要。

因此，对NY/T2688-2015进行修订具有紧迫的现实意义和深远的技术价值：

1.提升检测性能：通过采纳经广泛验证的、灵敏度更高的引物探针体系，显著提高对低浓度病原核酸的检出率，降低假阴性风险，为疫情精准监测提供技术保障。

2.适应防控新需求：满足对传毒媒介柑橘木虱带毒率的精准监测，以及对疑似病株（包括芸香科及非芸香科寄主）的快速鉴定需求，支撑源头防控和传播阻断。

3.保持技术先进性：确保我国HLB检测标准与国际前沿技术接轨，提升我国在植物病害分子检测领域的标准化水平和国际话语权。

4.规范行业实践：通过优化采样、样品处理与操作流程，进一步统一各检测实验室的操作规范，确保检测结果的准确性、可比性和可重复性，为行政监管和科学决策提供可靠依据。

2.范围与主要技术内容

本标准为修订标准，规定了使用实时荧光定量PCR技术检测柑橘黄龙病菌亚洲种的方法。其适用范围明确为：适用于柑橘等芸香科植物疑似病株、其