大蓟和小蓟药材质量控制方法及总黄酮制备工艺研究.docVIP

大蓟和小蓟药材质量控制方法及总黄酮制备工艺研究

关于大蓟和小蓟药材的质量控制方法及总黄酮制备工艺研究，可从以下维度系统展开：

一、大蓟与小蓟药材质量控制方法研究

大蓟（Cirsiumjaponicum）和小蓟（Cirsiumsetosum）均为菊科蓟属植物，活性成分以黄酮类为主，但药材基原、性状及特征成分存在差异，需针对性建立质量控制体系。

1.鉴别方法

(1)性状鉴别

-大蓟：茎粗壮（直径0.5~1.5cm），被密毛；叶羽状深裂，边缘具长短不等的针刺；头状花序顶生，总苞钟状，苞片多层带刺。

-小蓟：茎纤细（直径0.2~0.5cm），无毛；叶边缘具尖刺（无深裂）；头状花序单生或簇生，总苞卵形，苞片少刺。

(2)显微鉴别

-大蓟：叶下表皮非腺毛多（长100~300μm），具壁疣；茎横切面髓部大，草酸钙结晶多为簇晶。

-小蓟：叶下表皮非腺毛少（长50~150μm），无壁疣；茎髓部小，草酸钙结晶多为方晶。

(3)薄层色谱（TLC）鉴别

-大蓟：以芦丁为对照品，对照药材为参比，展开剂采用乙酸乙酯-甲酸-水（8:1:1），紫外365nm下显相同荧光斑点。

-小蓟：以蒙花苷为对照品，对照药材为参比，展开剂采用甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:4:1），紫外365nm下显相同荧光斑点（2020版药典方法）。

2.检查项

-常规检查：水分（≤13%）、总灰分（大蓟≤10%，小蓟≤12%）、酸不溶性灰分（大蓟≤3%，小蓟≤5%）。

-有害物质：重金属（铅≤5mg/kg、镉≤0.3mg/kg）、农药残留（六六六/滴滴涕≤0.1mg/kg）、二氧化硫残留（≤150mg/kg），符合《中国药典》要求。

3.含量测定

(1)总黄酮含量测定

-方法：亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法（紫外分光光度法，λ=510nm）。

-步骤：药材粉碎→70%乙醇回流提取→滤液浓缩→加显色剂反应→测吸光度→对照品（芦丁）标准曲线计算含量。

-限度：大蓟总黄酮（以芦丁计）≥0.8%，小蓟≥0.6%（参考药典及文献）。

(2)特征单体含量测定

-大蓟：HPLC法测芦丁，色谱条件：C18柱（250×4.6mm），流动相甲醇-0.1%磷酸水（50:50），流速1mL/min，检测波长360nm，限度≥0.1%。

-小蓟：HPLC法测蒙花苷，色谱条件：C18柱，流动相甲醇-0.4%磷酸水（55:45），流速1mL/min，检测波长334nm，限度≥0.7%（2020版药典要求）。

(3)指纹图谱

-建立HPLC指纹图谱，标定10~15个共有峰，采用相似度评价（≥0.90），用于药材批次一致性及真伪鉴别。

二、大蓟与小蓟总黄酮制备工艺研究

总黄酮制备需兼顾提取率、纯度及成本，核心步骤为提取+纯化。

1.提取工艺优化

(1)提取方法选择

-超声提取：效率高、时间短，适合实验室小试；

-回流提取：适合工业化生产，提取更彻底；

-酶解辅助提取：用纤维素酶/果胶酶破坏细胞壁，提高黄酮溶出率（酶解条件：pH4.5~5.5，温度40~50℃，酶用量0.5%~1%）。

(2)工艺参数优化

以总黄酮提取率为指标，采用响应面法/正交试验优化关键因素：

-乙醇浓度：60%~75%（黄酮类极性中等，乙醇为最优溶剂）；

-料液比：1:20~1:30（平衡提取率与溶剂成本）；

-提取时间：超声30~60min，回流1~2h；

-提取次数：2次（减少溶剂消耗）。

示例：小蓟总黄酮超声提取最佳条件——乙醇浓度65%，料液比1:25，超声时间40min，提取率可达2.3%（文献数据）。

2.纯化工艺研究

(1)大孔树脂纯化

-树脂筛选：优先选择AB-8/D101/HPD100（对黄酮吸附选择性强、解吸率高）；

-优化条件：

-吸附：上样液浓度1~2mg/mL（总黄酮），流速1BV/h，pH5~6；

-洗脱：70%乙醇洗脱（2~3BV），流速1BV/h；

-效果：纯化后总黄酮纯度从15%~20%提升至50%~70%。

(2)聚酰胺树脂纯化

-利用氢键吸附黄酮类，洗脱剂采用30%~80%乙醇梯度洗脱，纯度可达60%~85%（适合高纯度需求）。

(3)验证

-纯度测定：HPLC归一化法或紫外法；

-回收率：≥85%；

-稳定性：纯化产物在4℃避光条件下储存3个月，含量变化≤5%。

3.工业化放大考虑

-提取：采用连续超声提取或动态回流提取设备；

-纯化：树脂柱串联工艺，减少溶