中药中吡咯里西啶类生物碱检测 液相色谱-串联质谱法.docxVIP

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中药中吡咯里西啶类生物碱的检测液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了中药中蓝蓟定、蓝蓟定氧化物、芝麻菜叶千里光碱氧化物、欧天芥菜碱、欧天芥菜碱氧化物、天芥菜碱、欧天芥菜碱氧化物、印美定、印美定氧化物、千里光碱、千里光碱氧化物、毛果天芥菜碱、毛果天芥菜碱氧化物、石松胺、石松胺氧化物、野百合碱、野百合碱氧化物、倒千里光碱、倒千里光碱氧化物、千里光宁、千里光宁氧化物、千里光菲灵碱、千里光菲灵碱氧化物、春光千里碱、春千里光碱氧化物、克氏千里光碱、毛束草碱的液相色谱-串联质谱法检测方法。

本标准适用于一点红、菊三七、千里光、广东土牛膝、消炎利胆片中上述27种吡咯里西啶类生物碱的检测，其他中药可参照执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定

中华人民共和国药典

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

中药traditionalChinesemedicine

包括：中药材、中药饮片、中成药、中药配方颗粒。

4方法提要

供试品用酸水提取，用混合阳离子交换固相萃取柱净化富集，用液相色谱-串联质谱法检测，离子源为电喷雾（ESI）离子源，正离子扫描模式，利用多反应监测（MRM）模式，在选定的工作条件下，用十八烷基硅烷键合核壳硅胶为填充剂色色谱柱分离，外标法定量，计算供试品中吡咯里西啶类生物碱的质量分数。

5试剂和材料

5.1一般要求

本方法所用试剂，除另有规定外，均为色谱纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。

5.2试剂

a)甲醇（CH3OH）；

b)甲酸（HC0OH）；

c)甲酸铵（HC0ONH4）；

d)硫酸：分析纯；

e)氨水：分析纯；

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f)0.05mol/L硫酸溶液：取硫酸3mL，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀；

g)8%氨水–甲醇溶液：取氨水160mL，缓缓注入适量甲醇中，冷却至室温，加甲醇稀释至500mL，摇匀；

h)50%甲醇：取甲醇50mL，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至100mL，摇匀；

i)0.05%甲酸溶液(含10mmol/L甲酸铵)：取0.5mL甲酸，0.63g甲酸铵，缓缓注入适量水中，加水稀释至1000mL，摇匀；

j)0.05%甲酸的甲醇溶液(含10mmol/L甲酸铵)：取0.5mL甲酸，0.63g甲酸铵，缓缓注入适量甲醇中，加甲醇稀释至1000mL，摇匀。

5.3材料

a)微孔过滤膜（有机相）：0.22μm；

b)PCX固相萃取小柱（200mg/6mL）。

5.4标准物质

27种吡咯里西啶类生物碱混合对照：DIKMA，100μg/mL。标准物质名称、化学分子式、CAS号见表A.1。

5.5标准曲线溶液配制

5.5.1混合对照品贮备溶液的配制

精密量取27种吡咯里西啶类生物碱混合对照适量，用甲醇制备制成浓度为1000ng/mL的混合对照品贮备溶液。

5.5.2混合标准工作溶液的制备

精密量取混合对照品贮备溶液适量，用甲醇制成浓度为5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的系列混合对照品溶液。

6仪器和设备

a)液相色谱-串联质谱仪：三重四极杆串联质谱；配备离子源为电喷雾(ESI)离子源。

b)色谱柱：十八烷基硅烷键合核壳硅胶为填充剂（AgilentPoroshell120EC-C18，柱长为150mm，内径为3mm，粒径为2.7μm）。

c)超声波清洗器：BRANSONM8800H-C，功率250W，频率40kHz。

d)高速冷冻离心机：ThermoST16R，最高15200r/min。

e)分析天平：感量0.1mg。

f)量瓶：20mL、10mL、5mL。

g)微量移液器：100-1000μL量程、20-200μL量程。

7方法

7.1供试品溶液的制备

取100g供试品粉碎，混合均匀，过三号筛，密封保存备用。精密称定取供试品粉末3.0g，置于100mL具塞离心管中，加入0.05mol/L硫酸溶液50mL，称重，超声处理30min，放至室温，再称定重量，用0.05mol/L硫酸溶液补足减失的重量，离心5min（4000r/min），精密吸取上清液10mL进行固相萃取柱萃取。固相萃取柱先分别用5mL甲醇和5mL