岛津液相色谱培训.pptx

岛津液相色谱培训

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基本原理与概述

仪器结构与组件

操作流程与设置

数据分析与软件工具

培训评估与后续

目录

CONTENTS

01

基本原理与概述

液相色谱基础原理

高效液相色谱基于样品组分在固定相和流动相之间的分配系数差异实现分离，保留时间受分子极性、疏水性及固定相化学性质影响。反相色谱中非极性固定相与极性流动相的组合是最常见模式，适用于80%以上的有机化合物分析。

分离机制与保留行为

采用30-60MPa高压恒流泵确保流动相稳定输送，相比经典液相色谱，其理论塔板数可提升2-3个数量级，基线噪声控制在±0.1mAU以内，显著提高检测灵敏度。

高压输液系统

紫外检测器通过200-400nm波长范围内的吸光度变化进行定量，二极管阵列检测器可同步获取全光谱数据；示差折光检测器适用于无紫外吸收化合物，但灵敏度较低（约1μg级别）。

检测器技术原理

配备LC-40系列泵单元，最高压力达130MPa，支持0.1-5mL/min流量范围，延迟体积仅35μL，配合专利SIL-40自动进样器可实现0.1μL进样精度，RSD0.3%。

岛津仪器核心优势

Nexera系列超高效液相系统

LabSolutionsDB软件集成QSAR/QSPR预测模型，可自动优化梯度程序、柱温和流动相比例，将方法开发周期从传统72小时缩短至8小时以内。

智能化方法开发系统

Prominence系列配备2D-LC模块，通过中心切割或全二维模式实现复杂基质分离，正交分离选择性差异达85%以上，适用于中药指纹图谱等挑战性分析。

多维色谱技术

药物质量控制

针对EPA539.1标准开发的多残留方法可一次性检测23种内分泌干扰物，固相萃取富集因子达1000倍，地表水样中双酚A的回收率为98.2±3.5%。

环境污染物分析

食品安全检测

基于AOAC官方方法2008.03，建立黄曲霉毒素HPLC-FLD检测流程，玉米基质中B1的定量限为0.05μg/kg，线性范围跨越4个数量级（R²0.999）。

按照USP/EP标准建立含量测定方法，可同时检测主成分和12种相关物质，检测限达0.01%（w/w），满足ICHQ3A/B要求。典型案例包括抗生素效价测定（RSD1.5%）和基因毒性杂质监测（LOQ0.1ppm）。

应用领域简介

02

仪器结构与组件

采用双柱塞往复式设计，确保流动相流速稳定（0.001-10mL/min），压力波动小于±1%。

高压恒流输液功能

通过比例阀动态调节多通道溶剂配比，混合精度达±0.1%，支持二元至四元梯度程序。

梯度混合精度控制

集成主动阻尼装置与电子补偿算法，将基线噪音降低至5μAU，保障微量组分检测灵敏度。

脉冲抑制技术

泵系统功能详解

定量环精准装载

推荐使用≥5倍环体积的样品溶液冲洗，避免残留误差，20μL定量环的RSD需控制在0.3%以内。

针座密封维护

每月更换PTFE/石墨复合密封垫，防止交叉污染，进样针穿刺次数超过10万次需校准定位精度。

六通阀切换时序

切换延迟时间应设为0.1-0.3秒，与数据采集触发信号同步，避免色谱峰形畸变。

进样器操作要点

紫外-可见检测器

采用氘灯/钨灯双光源，波长范围190-800nm，光谱带宽2nm，配备温控流通池（±0.1℃）降低基线漂移。

荧光检测器

激发波长200-700nm，发射波长280-900nm，灵敏度达0.1ppb菲罗啉，需定期校准光栅单色器波长精度。

示差折光检测器

恒温控制±0.01℃，折射率范围1.00-1.75RIU，糖类分析时需搭配柱温箱（30-80℃）补偿温度波动。

检测器类型与特性

03

操作流程与设置

开机初始化步骤

仪器通电与自检

依次开启液相色谱仪、检测器及工作站电源，等待系统完成硬件自检，确认各模块状态指示灯显示正常，无报警提示。

色谱柱安装与平衡

选择合适的色谱柱并正确安装至柱温箱，以初始流动相条件以低流速（如0.2mL/min）平衡色谱柱至少30分钟，直至基线稳定。

流动相准备与脱气

根据分析方法要求配制流动相，使用超声波脱气仪或在线脱气装置去除溶解气体，避免基线波动和气泡干扰。

样品制备方法

样品溶解与过滤

将待测样品溶解于与流动相兼容的溶剂中，使用0.22μm或0.45μm有机系/水系滤膜过滤，避免颗粒物堵塞色谱柱或系统流路。

流动相比例设定

在工作站中设置梯度程序，明确各时间点的流动相比例变化（如乙腈-水体系从5%乙腈线性升至95%），并设定梯度斜率以保证分离效率。

柱温与流速优化

检测器参数同步

梯度程序配置

根据色谱柱类型和样品性质调整柱温（如25-40℃）及流速（如1.0-1.5mL/min），平衡时间需覆盖梯度返回初始条件后的稳定需求。

配置紫外检测器波长或质谱扫描模式，确保与梯度程序同步切换，避免关键峰未被有效采