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鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）弱毒株鸡体传代毒基因序列变异与毒力相关性解析

一、引言

1.1研究背景与意义

传染性法氏囊病（InfectiousBursalDisease，IBD）是由传染性法氏囊病病毒（InfectiousBursalDiseaseVirus，IBDV）引起的一种对雏鸡危害极大的急性、高度接触性传染病。该病主要侵害3-12周龄的雏鸡与青年鸡，尤其是3-6周龄的雏鸡最为易感。IBDV会特异性地感染并破坏鸡的法氏囊这一重要的中枢免疫器官，导致法氏囊发生炎症、萎缩和纤维化等病变。这使得鸡体内的B淋巴细胞发育受阻、数量减少，从而引发免疫抑制。免疫抑制后的鸡群对其他疾病的抵抗力大幅下降，极易遭受多种并发和继发性病毒或细菌感染，如新城疫病毒、大肠杆菌等，显著增加了鸡群的发病率和死亡率。

IBD在全球范围内广泛传播，给养鸡业带来了沉重的经济负担。自1957年该病首次在美国被发现以来，迅速蔓延至世界各地。我国自1979年首次报道以来，也一直深受其害，近年来随着养鸡业规模化发展，IBD的防控形势依然严峻。患病鸡只的生长发育受到抑制，饲料转化率降低，导致养殖成本上升；病鸡和死鸡的淘汰以及高昂的治疗费用，都严重影响了养鸡业的经济效益。

目前，IBD的防控主要依赖疫苗接种，但疫苗的免疫效果受到多种因素的影响，其中IBDV毒株的毒力变异是导致疫苗免疫失败的重要原因之一。因此，深入研究IBDV弱毒株鸡体传代毒基因序列与毒力关系，对于揭示IBDV的致病机制、开发更有效的疫苗以及制定合理的防控策略具有重要的理论和实践意义。

1.2研究目的

本研究旨在通过对IBDV弱毒株在鸡体连续传代后的基因序列进行测定和分析，结合其毒力变化情况，探讨IBDV弱毒株鸡体传代毒基因序列与毒力之间的关系，为进一步揭示IBDV的致病机制、开发新型疫苗以及优化防控措施提供理论依据。具体研究目的如下：

测定IBDV弱毒株鸡体传代毒的基因序列：运用先进的分子生物学技术，精确测定IBDV弱毒株在鸡体连续传代后的全基因组序列，为后续的分析提供基础数据。

分析基因序列的变化：对不同代次的IBDV弱毒株鸡体传代毒基因序列进行细致的比对和分析，找出基因序列中的突变位点和变异区域，深入研究这些变化的规律和特点。

研究基因序列变化与毒力的关系：结合IBDV弱毒株鸡体传代毒的毒力测定结果，全面分析基因序列变化与毒力之间的内在联系，明确影响毒力的关键基因位点和变异区域，为揭示IBDV的致病机制提供重要线索。

为疫苗研发和疾病防控提供理论依据：基于对IBDV弱毒株鸡体传代毒基因序列与毒力关系的研究成果，为开发更加高效、安全的IBD疫苗提供坚实的理论基础，同时为制定科学合理的IBD防控策略提供有力的技术支持，从而有效降低IBD对养禽业的危害，促进养禽业的健康发展。

1.3国内外研究现状

国外对IBDV的研究起步较早，在IBDV的生物学特性、致病机制、病毒的传播与感染机制以及疫苗研发等方面取得了一系列成果。明确了IBDV属于双RNA病毒科禽双RNA病毒属，其基因组由A、B两个片段组成。A片段编码VP2、VP3、VP4和VP5蛋白，其中VP2蛋白是主要的免疫原性蛋白，其高变区氨基酸的变异与病毒的抗原性改变密切相关；B片段编码VP1蛋白，在病毒RNA复制过程中发挥关键作用。在疫苗研发领域，早期研发的活疫苗，如弱毒疫苗，通过对病毒进行连续传代使其毒力减弱，虽能在一定程度上诱导鸡群产生主动免疫，但存在毒力返强和免疫抑制等风险。随着技术的发展，基因工程疫苗成为研究热点，如利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达IBDV的VP2蛋白，制备重组亚单位疫苗。这种疫苗具有安全性高的优点，但生产工艺复杂，成本较高，且部分表达系统存在不能诱导中和性抗体或无法兼顾高保护力和避免法氏囊损伤的问题。此外，核酸疫苗，尤其是DNA疫苗的研究也在不断推进，匈牙利学者Fodor等构建了IBDV-D78株和GP40株的VP2基因及D78株的VP2/VP4/VP3真核表达质粒，免疫SPF鸡后观察免疫反应和保护效果，但存在需要大剂量DNA疫苗维持免疫反应以及保护率有限等问题。

国内对IBDV的研究自1979年首次报道以来，在病毒的分离鉴定、流行病学调查、致病机理以及疫苗研发等方面也开展了大量工作。研究发现我国存在经典型、变异型和超强毒型等多种类型的IBDV毒株，且病毒的变异导致免疫失败的情况时有发生。在疫苗研发方面，除了传统的活疫苗和灭活疫苗，国内也积极开展了多种类型基因工程疫苗的研究。例如，利用重组大肠