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类氨基酰—tRNA合成酶蛋白质功能的研究

一、氨基酰-tRNA合成酶概述

氨基酰-tRNA合成酶（aaRS）在遗传解码过程中扮演关键角色，其核心功能是催化氨基酸与对应的tRNA发生酯化反应，生成的氨基酰-tRNA作为原料参与蛋白质的生物合成，这一反应的高度专一性是保障蛋白质生物合成准确性的基础。氨基酸与tRNA的反应位点位于tRNA的3-末端腺苷酸核糖的2或3羟基。根据aaRS的一级序列特征结构花式以及催化功能域拓扑结构，可将其清晰地分为两类，每类各包含10种aaRS。

在哺乳动物细胞内，存在着两套相对独立的蛋白质翻译系统。细胞质中的翻译系统承担着细胞绝大多数蛋白质的翻译任务；线粒体中的翻译系统则负责部分线粒体蛋白质的合成。这两套系统各自拥有专属的aaRS及tRNA。从进化视角看，线粒体aaRS与原核生物aaRS相似度颇高，而细胞质aaRS的保守性相对较低，这与线粒体的内共生起源假说相契合。但这种翻译系统的二重性也带来了问题，以原核生物aaRS为靶点设计的药物，常因具有线粒体毒性，给药物研发和筛选增添了阻碍。

随着生物进化，高等真核生物细胞质aaRS的催化核心的N-端或C-端，大多出现了原核生物所没有的疏水延伸结构域。这些结构域功能多样，一是作为tRNA结合结构域，助力aaRS在复杂的真核细胞环境中精准识别相应tRNA；二是参与构建大的复合物；三是赋予aaRS除催化之外的新功能。例如，哺乳动物的WRS和YRS能通过蛋白酶水解，对血管生成因子起到激活或抑制作用。

二、细胞质中aaRS复合物

在高等真核生物的细胞质中，九种aaRS与三种辅助因子共同构建起庞大的aaRS复合物，其中EPRS是具有双功能的单链酶。复合物成员包括MRS、RRS、LRS、IRS、DRS、QRS、KRS等，辅助因子为p18、p38、p43。尽管该复合物早在20世纪70年代后期就在多种哺乳动物组织中被发现，但近十年才在深入研究上取得显著进展。复合物中的aaRS相较于原核生物形式，在N-端或C-端有明显延伸，这些疏水性延伸中的特定功能结构域，可能参与了复合物的组装。

研究表明，p38在复合物中可能起着结构骨架的关键作用。在p38基因敲除小鼠中，复合物消失，且许多成员酶的表达量与氨基酰化水平显著下降，这显示出复合物对成员酶催化反应及表达稳定性的促进作用，同时暗示复合物可能存在尚未被揭示的高度组织性整体功能。近期发现复合物成员与延伸因子相互作用，表明其可能参与翻译延伸的整体调控，并在“通道”机制中发挥作用。

复合物的三个辅助因子也各自具备重要细胞功能。p43经蛋白酶水解产生的血管内皮单核细胞活化肽（EMAPII），可通过活化丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）和核因子kB（NK-kB），引发单核细胞黏附和血管内皮细胞凋亡。p38能通过泛素化途径降解c-myc的转录活化因子远上游元件结合蛋白（FBP），下调c-myc表达，其基因敲除会致使小鼠肺泡不发育。p18可通过与复制检查点激酶通路（ATM/ATR通路）相互作用，促进p53基因表达，参与DNA损伤修复，具有较强的肿瘤抑制作用，p18一个拷贝失活，就会使小鼠肿瘤发生频率大幅上升。不过，目前尚不清楚这些辅助因子的细胞功能与aaRS复合物的具体关联。

三、线粒体中tRNA与疾病的关联

与细胞质aaRS不同，线粒体aaRS及其对应的tRNA在进化上较为保守，形式古老，至今未发现其具有催化功能之外的新功能。但近年来研究发现，在近200个致病性线粒体DNA突变中，近一半位于编码线粒体tRNA（hmtRNA）的基因上，而22种hmtRNA基因仅占线粒体基因组大小的10%，相比之下，细胞质tRNA基因的突变与疾病关联的报道极少。

这主要是因为细胞质tRNA基因多为多拷贝，单个拷贝突变对生命体健康影响不明显；而hmtRNA基因均为单拷贝，任何突变都会直接冲击线粒体翻译系统的稳定性，且tRNA基因的点突变可能对其活力产生致命影响，不像蛋白质基因可通过密码子摇摆性和三级结构代偿来减轻单点突变的影响。hmtRNA与人类疾病的紧密联系，吸引众多科学家深入探究。虽然hmtRNA基因突变致病的分子机理尚未明确，但越来越多证据显示，致病性突变会严重破坏hmtRNA的结构和功能。对hmtRNA结构和功能特性的系统研究，有助于揭示线粒体中特殊的tRNA氨基酰化系统，阐释相关疾病的分子发病机制，甚至催生新的疾病诊断和治疗方法。

四、aaRS的非经典功能研究进展

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