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第十章化学发光免疫分析技术;;发光:是指分子或原子中的电子吸取能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子的过程。

根据形成激发态分子的能量来源不一样可分为:

光照发光、生物发光、化学发光等。

;;荧光素;化学发光;某些化学反应能释放足够的能量把参与反应的物质激发到能发射光的电子激发态。

反应过程可简朴地描述如下：

A十BC*

C*C＋h·γ

其中γ为光子，C*表达C处在单线激发态;若激发能传递到另一种未参与化学反应的分子D上，使D分子激发到电子激发态，D分子从激发态回到基态时发光。

反应过程可表达如下：

A十BC*

C*十DC十D*

D*D十h·γ;该反应必须提供足够的激发能,并由某一环节单独提供,由于前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光;

要有有利的反应过程,使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态;

激发态分子必须具有一定的化学发光量子产率，释放出光子,或者可以转移它的能量给另一种分子使之进入激发态并释放出光子。;化学发光强度（ICL）取决于化学反应的速率（dc/dt）和反应的化学发光量子产率（ΦCL）

ICL=ΦCL×dc/dt

ΦCL=Φr×Φf

Φr:生成激发态产物的量子产率，也就是每一种参与反应的分子产生的激发态效率；

Φf:激发态产物分子的发光量子产率，也就是每一种激发态产生的光子数效率，对于一定的化学发光反应，为一定值。;化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA),是将具有高敏捷度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。

免疫反应系统、化学发光分析系统;化学发光剂;发光的量子产率高；

物理-化学特性要与被标识或测定的物质相匹配；

能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物；

其化学发光常是氧化反应的成果；

在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性。;;（luminol，5‘-氨基-2，3-二氢-1，4-酞嗪二酮）

鲁米诺在碱性条件下可被某些氧化剂氧化，发生化学发光反

应，辐射出最大发射波长为425nm的化学发光;〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷〕

AMPPD在碱性条件下，被碱性磷酸酶(ALP)酶解成相称稳定AMP-D阴离子，30min内分解，发出470nm波长持续性光，60min内保持相对稳定。;（二）直接化学发光剂;在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。;需要电极表面进行电化学反应

三联吡啶钌[RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电子供体三

丙胺（TPA）在阳电极表面可同步失去一种电子而发生氧

化反应。;在电极阳极表面，TPA和[RU(bpy)3]2+各失去电子，成为TPA·强还原剂和[RU(bpy)3]3+强氧化剂，TPA·将高能电子递给[RU(bpy)3]3+，使其成为激发态[RU(bpy)3]2+·，而后者不稳定，发射波长620nm光子，答复到基态[RU(bpy)3]2+。

在电极持续存在状况下，上述反应周而复始发生，产生许多光子，使光信号增强，得以检测到。;标识技术;只合用于含糖量较高的酶。过碘酸钠将多糖氧化为醛

基，醛基与抗体分子上的氨基形成Schiff碱而结合。

后者可深入用NaBH４(或乙醇胺)还原生成稳定的酶

标识抗体。;N-羟基琥珀酰亚胺活化法;发光剂的选择；

被标识蛋白质的性质；

标识措施的选择；

原料比；

标识率；

温度；

纯化与保留。;化学发光免疫分析系统;类型：

第一种是以酶标识抗原或抗体，通过酶促反应使底物发光，检测发光强度。

第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标识物，直接通过化学发光反应检测标本中抗原或抗体的含量。

第三种是以电化学发光剂标识抗原或抗体，在电极表面由电化学引起的化学发光反应。;发光酶免疫分析;技术要点;措施学评价;化学发光免疫分析;技术要点;磁微粒技术分析环节;措施学评价;电化学发光免疫分析;电化学发光免疫测定示意图;电化学发光动画;措施学评价;化学发光免疫技术应用;

1.甲状腺激素

2．生殖激素

3．垂体激素和皮质激素