蛋白质组学研究方法.pptVIP

;第一节概述

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1.蛋白质组学比基因组学研究复杂

蛋白质数目大于基因组数目，人类基因万左右，蛋白质﹥10万

蛋白质是动态的

4种核苷酸-DNA;20氨基酸-蛋白质

蛋白质不能用PCR扩增

蛋白质不能自动化测序

;DNA分析（cDNAMicroarray）与蛋白质分析（2-DE-MS）方法的比较;蛋白质分析技术的发展

2D,IPG,2D-液相色谱

图像分析与数据处理技术

生物质谱技术（MALDI-TOF-MS,ESI-MS)

MudPIT（多维蛋白质鉴定技术）

ICAT（同位素编码亲和标签技术）

双色荧光技术

酵母双杂交

Proteinchip;;第二节大规模的蛋白质分离技术;一、二维凝胶电泳技术（2D);

1975年由O’Farrell提出的。

是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与

展示的分离技术。

其原理是在相互垂直的两个方向上，分别

基于蛋白质不同的等电点和分子量将蛋白

质分离开。

20世纪80年代初出现固相化pH梯度

（IPG)(第一相等点聚焦）。

不足之处：膜蛋白，碱性蛋白，低丰度蛋白分离

困难。

解决办法？;低丰度蛋白：窄范围pH,加大上样量，除去高丰度蛋白。;2-DEanalysisofnon-fractionatedsoybeanleafproteins

(Left)andCa2+/phytatefractionatedsoybeanleaf

proteins(Right).;*;膜蛋白：分步提取法。;;高通量与自动化

2D/MS为基础的蛋白质组技术体系自动化主要集中在2D后的样品处理。;蛋白质识别系统的自动化;1.实验设计，采样量

2.重复性问题

3.动态范围

4.蛋白质的丢失

5.通量与自动化问题;二、色谱—质谱技术;*;2-DE与2D-HPLC的比较;采用二维色谱—串联质谱技术可以对

蛋白质混合物进行直接分离与鉴定;2．同位素标记—亲和色谱—质谱技术;三、一维电泳(色谱)—质谱技术;1886年Goldstein发明早期质谱仪的离子源，1942

年第一台商品化质谱仪出现——分析小分子化合物。

20世纪80年代末期的两项软电离质谱技术—电喷

雾电离质谱（ESI-MS)和基质辅助激光解吸电离飞

行时间质谱(MALDI-TOF-MS)——分析蛋白质。

;*;谢谢大家！