细胞生物学研究方法概览：显微成像与细胞化学技术.pdfVIP

章节提要

第二章细胞生物学研究方法

时展生命科学学院生物技术及应用专业

本章节涉及以下六个模块：

一、显微成像技术

二、细胞化学技术

三、细胞分选技术

四、细胞工程技术

五、分离技术

六、分子生物学方法

本章节对细胞生物学经典技术及新技术的实验方法进行了简单的解释和介绍。

一、显微成像技术

无论是何种显微镜，镜像的形需要三个基本要素：照明系统，被观察

的样品，聚焦和成像的透镜系统。照明系统的波长是显微镜成像的一个重要因素，波

长决定能被检测样品的最小极限，波长越小，波幅的跨度值越小，所能观察到的

物体极限就越小。电子的波长比光子的波长小得多，所以很小的物体只能用电子显

微镜进行观察。光和电子都具有波的行为，当他们穿过透镜到达聚焦点时，由于波

的性质而成像。

常用的光学显微镜种类很多，如，相差显微镜，暗视野显微镜，偏光显微

镜和荧光显微镜等。荧光显微镜以紫外线光源照射被检物体，使之发出荧光。

相差显微镜是利用光的衍射和特性使相位差变成振幅差，表现为明与

暗的对比，使肉眼得以观察到无色透明物体中的细节。。

暗视野显微镜使光线不能直接进入物镜和目镜，在观察时不能直接看到明

亮光线，只能观察被检物体所反射或衍射的光线，使被检物体在的视野中呈

现明亮的相，增大反差，提高分辨率。

倒置显微镜的结构构成与普通显微镜一样，只是物镜与照明系统的位置颠

倒。

光学显微镜的样品包括以下几步：样品的固定，包埋和切片，染色。

自显影技术使用感光胶片测定细胞内某种被性标记的物质在细胞

固定时所在的位置。

电子显微镜可分为两大类：透射电子显微镜和扫描电子显微镜。透射电子

显微镜主要是让样品而成像。由真空系统，电子枪，电磁透镜，照相

系统组成。扫描电子显微镜利用二次电子信号成像来观察样品的表面形态。

电子显微镜的样品需要超薄切片，在组织固定时要求不破坏结构，样

品要具有一定的反差。这些要求可通过负染色、喷镀技术、冷冻断裂复型和冷冻

蚀刻技术实现。

间接成像技术具有原子级分辨率，如扫描隧道显微镜，原子力显微镜，X

射线衍射等。

二、细胞化学技术

这类方法有酶细胞化学技术、免疫细胞化学技术、自显影技术和示踪细

胞化学技术等。

酶细胞化学技术基本原理是利用了细胞内酶与底物的相互作用。包括两步重

要的反应：第一反应是酶作用于底物，称为酶反应；第二反应为捕捉剂与初级反

应产物的作用，称为捕捉反应。酶反应和酶与底物的特异性有很大关系，而捕捉

反应主要是将酶反应产物经过显微镜等技术间接的表现出来，从而将肉眼无法观

察的酶反应转化为可识别的反应。

免疫细胞化学技术是利用了免疫反应定位组织或细胞中抗原成分的一类技

术。主要分为两大类：免疫荧光技术和免疫电镜技术。免疫荧光技术利用了荧光

标记技术，免疫电镜技术主要是用一些特殊技术增强显微镜样品的反差。这些标

记方法有：免疫铁蛋白技术、免疫酶标技术、免疫胶体金技术。

细胞化学技术还有细胞化学的定量和定性分析技术。如，显微分光光度术、

显微荧光光度术和核磁技术。

三、细胞分选技术

细胞分选技术主要是利用流式细胞仪对细胞或者进行分选。流式细胞

仪主要由激光光源、流室、讯号检测器、讯号分析部件构成。在细胞分选中，首

先，将细胞、特异性抗体和荧光物质一起进行温育，当分子探针和细胞表面抗原

结合，将细胞分离出来，进行稀释，再将稀释的细胞送入超声波振荡器，细

胞悬浮液被分离成即为细小的细胞液滴，一个液滴中仅含有一个细胞。最后将这

些液滴透过激光。只有带有荧光标记的液滴才会激活检测器，使带有荧光标记的

细胞鞘液带上电荷，然后进过电场时，就向一定的方向偏转，最后落入一些特定

的收集器中。无荧光标记的液滴同理带相反电荷，落入另外的收集器。

分选采用相同的原理。

四、细胞工程技术

细胞工程技术是把细胞生物学和遗传学相结合的领域，可以有计划的改变或

者创造细胞遗传学的方法。主要的内容包括：细胞融合、细胞生物反应器、染色

体转移、细胞器移植、转移、细胞及组织培