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专题一基因工程

【高考目标定位】

1、专题重点:DNA重组技术所需的三种基本工具;基因工程的基本操作程序四个环节;基因工程在农业和医疗等方面的应用；蛋白质工程的原理。

２、专题难点:基因工程载体需要具备的条件;从基因文库中获取目标基因；运用PCＲ技术扩增目标基因;基因治疗；蛋白质工程的原理.

DNＡ重组技术的基本工具

教材梳理：

知识点一基因工程的概念:基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计，并经过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特征,从而发明出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。因为基因工程是在DNＡ分子水平上进行设计和施工的，所以又叫做DNA重组技术.

注意：对本概念应从如下几种方面了解:

操作环境

生物体外

操作对象

基因

操作水平

DNA分子水平

基本过程

剪切→拼接→导入→体现

成果

人类需要的基因产物

知识点二基因工程的基本工具

1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀

(1)限制性内切酶的起源:重要是从原核生物中分离纯化来的。

(2）限制性内切酶的作用:可以识别双链DＮA分子的某种特定的核苷酸序列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。

（3)限制性内切酶的切割方式及成果:①在中心轴线两侧将DNA切开，切口是黏性末端。②沿着中心轴线切开DNA,切口是平末端。

２。DNＡ连接酶－—“分子缝合针”

（1）起源：大肠杆菌、T4噬菌体

(2）DNＡ连接酶的种类:E。colｉＤＮA连接酶和Ｔ4ＤNA连接酶.

（3)作用及作用部位:E．ｃｏliDＮA连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键，Ｔ４DNＡ连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。

注意：比较关于的DNA酶

（1)DNＡ水解酶:可以将ＤNA水解成四种脱氧核苷酸,彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基

（2)ＤNA解旋酶:可以将DNA或DNA的某一段解成两条长链,作用的部位是碱基和碱基之间的氢键．注意:使ＤNＡ解成两条长链的方法除用解旋酶以外,在适当的高温（如94℃)、重金属盐的作用下，也可使DNＡ解旋。

（3)ＤNA聚合酶:能将单个的核苷酸经过磷酸二酯键连接成DNA长链.

(4)DNＡ连接酶:是经过磷酸二酯键连接双链DＮＡ的缺口。注意比较DNA聚合酶和DNＡ连接酶的异同点。

３.基因进入受体细胞的载体——“分子运送车”

（1)分子运载车的种类：①质粒:常存在于原核细胞和酵母菌中,是一个分子质量较小的环状的裸露的DNA分子，独立于拟核之外。②病毒:常用的病毒有噬菌体、动植物病毒等。

(2)运载体作用:①是用它做运载工具，将目标基因转运到宿主细胞中去。②是运用它在受体细胞内对目标基因进行大量复制。

（3)作为运载体必须具备的条件：①在宿主细胞中保存下来并大量复制②有多个限制性内切酶切点③有一定的标记基因,便于筛选。

基因工程的基本操作程序

教材梳理:

基因工程的基本操作环节为四步曲：目标基因的获取；基因体现载体的构建;将目标基因导入受体细胞;目标基因的检测与鉴定。

一．目标基因的获取

１.目标基因:重要是指编码蛋白质的结构基因。（或者是具备调控作用的因子）

2．目标基因的获取方法:

基因组文库

从基因文库中获取

ｃＤＮA文库

人工合成逆转录法、依照已知的氨基酸序列推测脱氧核苷

(真核生物）序列、PCR技术扩增目标基因、DNＡ合成仪合成等.

（1）从基因文库中获取

基因文库:将含有某种生物不一样基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不一样的基因.

构建基因文库的目标：为了在不知目标基因序列的情况下，便于取得所需的目标基因。

基因组文库:含有一个生物的全部基因。

部分基因文库（如cDNA文库)：含部分基因，可由ｍRNA反转录而来。

(2)运用PCR技术扩增目标基因

PCＲ:是一项在生物体外复制特定ＤNA片段的核酸合成技术。

原理:DNA双链复制

原料：模板DNA;RＮA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶(Tａq酶)；

方法:DＮA受热变性解旋为单链、冷却后ＲＮA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链.

过程：热变性(90—95)、退火(55—60)、延伸(70—７5）．

特点:指数形式扩增

二．基因体现载体的构建(基因工程的关键—体外进行)

1.目标:使目标基因在受体细胞中稳定存在;可以遗传給下一代；使目标基因可以体现和发挥作用。

目标基因：依照需要来选择。

２.基因体现开启子：位于基因首端,ＲNA聚合酶识别和结合的部位,驱动转录基因。

载体的构成终结子:位于基因尾端，使转录在所需要的地方停下来。