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生物选修3知识点

(区别不一样工程和不一样操作水平)

专题1?基因工程

概念：按照人们的愿望,进行严格的设计，经过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物新的遗传特征，发明出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

基本原理：让目标基因在受体细胞内稳定且高效的体现

理论基础：ＤNＡ是生物遗传物质的发现,ＤNA双螺旋结构，遗传信息传递方式

关键:构建重组DNＡ分子

基本工具(技术基础)

Ｃｆ工具＆工具酶

１．限制性核酸内切酶

（１）起源：重要是从原核生物中分离纯化出来的

(不切割自身DNA的因素：原核生物中无该限制酶的识别序列或其已被修饰)

功效:识别和切割DNA分子内一小段特殊的脱氧核苷酸序列(偶数碱基对回文序列）

特异性体现：识别特定片段、切割该片段中的特定位点、形成一个末端

Ｃf—G↓GAＴCＣ——↓GATC—

成果:DＮＡ片段末端形成末端碱基互补的黏性末端或平末端

①用切割（质粒)

②依照目标基因的位置或剪辑序列来拟定限制酶的种类

③切割后的片段要画全

2.DNA连接酶

（1）功效:连接具备末端碱基互补的2个DNA片段,形成重组DNA分子

CfDNA聚合酶：只能将单个脱氧核苷酸逐个添加到已有的脱氧核苷酸链之后，

需模板DNA,连接磷酸二酯键

3．载体

（1)条件：①能在受体细胞中稳定保存并大量复制,基本不影响受体细胞正常生命活动

②一至多个限制酶酶切位点（必须在所需标记基因外),供外源DＮA片段插入

③标记基因,便于筛选含有重组DＮA分子的受体细胞

——往往需要依照需求改造天然载体

功效：①作为运载工具将目标基因转移到受体细胞内

——载体选质粒的因素：具备环状结构,可以携带目标基因

②运用它在受体细胞内对目标基因进行大量复制和转录／体现

质粒(最常用的载体）

一个可以自主复制，在细菌(或酵母菌)中独立于染色体之外存在的双链环状DNA分子

(４)其它载体：噬菌体、动植物病毒

(二)基因工程的基本操作程序

第一步：获取目标基因

目标基因：人们所需要的编码蛋白质的结构基因

方法

序列已知

①化学合成法——较长DNA单链合成过程中容易出现碱基缺失

如反转录法(e.g获取mRＮA逆转录成cDNA再用DNA聚合酶生成双链）

②聚合酶链式反映（ＰCR）扩增PolymerａseChaｉnRｅａcｔioｎ

（1）原料：水、缓冲液、４种游离脱氧核苷酸、TａqDＮA聚合酶、模板ＤＮA(……基因）、

对…基因特异的２段DＮA引物(防止相互或自身折叠）

（２)过程:第一步：加热至90～95℃，DNA在高温下变性解链

第二步：冷却到55～60℃,引物结合到互补DNＡ链（退火)

第三步:加热至７0～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成

能量起源于ｄNTＰ

(２)序列未知

建立基因文库:

建立一个包含目标基因在内的基因文库（保存在受体菌中),再从基因文库中获取

３.目标基因大量扩增/分子水平的克隆

①运用受体细胞(如E.coｌi）无性繁殖,运用基因探针钓取，再导入最终受体细胞

e.g目标基因→大肠杆菌→农杆菌→植物细胞→植物

(重要在细菌分裂时几何级扩增,尽管质粒独立于拟核，可在分裂时发生自我复制,

但因为多数细菌对胞内质粒数量有限制,故该种复制对扩增效果不大)

②PCR技术

第二步：形成重组ＤNＡ分子（基因体现载体:开启子＋目标基因+终结子+标记基因）

目标:转运目标基因，并使在受体内稳定存在、复制、体现/转录并稳定遗传(基因型X0）

过程：(１)单酶切：用同种限制酶分别切割目标基因和载体从而形成相同的粘性末端，然后用ＤNA连接酶将目标基因和载体连接起来

——有时用不一样限制酶也可以形成相同的粘性末端

(2）双酶切：用两种限制酶切割使目标基因和载体两端各形成两种粘性末端，防

止载体和目标基因自身环化

第三步:将重组Ｄ