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合成生物药物纯化工程师岗位招聘考试试卷及答案

一、填空题（每题1分，共10分）

1.蛋白纯化中最常用的疏水相互作用层析填料是______。

2.离子交换层析中，缓冲液pH应与目标蛋白pI相差至少______个单位。

3.生物药物纯化后除菌过滤常用的滤膜孔径是______μm。

4.纯化回收率计算公式为：回收率=______×100%。

5.层析柱再生常用的强碱试剂是______。

6.常用的蛋白浓度比色测定方法有BCA法和______法。

7.核酸纯化中去除蛋白质的常用试剂是______。

8.冻干生物药物常用的保护剂有蔗糖和______。

9.GMP要求纯化过程记录需包含______、日期、操作人员等信息。

10.亲和层析中，针对His标签蛋白的常用配体是______。

二、单项选择题（每题2分，共20分）

1.蛋白纯化工艺中，通常最先采用的层析步骤是（）

A.离子交换层析B.疏水相互作用层析C.亲和层析D.凝胶过滤层析

2.适合pH7.0左右使用的缓冲液是（）

A.Tris-HClB.醋酸-醋酸钠C.柠檬酸-柠檬酸钠D.硼酸-硼砂

3.层析柱峰形拖尾最可能的原因是（）

A.柱压过高B.样品未过滤C.填料压缩D.缓冲液浓度过低

4.滤膜完整性测试常用方法是（）

A.气泡点法B.重量法C.分光光度法D.电泳法

5.下列哪项不是蛋白回收率偏低的原因？（）

A.目标蛋白吸附填料B.样品降解C.洗脱条件不合适D.缓冲液pH接近pI

6.去除层析柱疏水杂质的试剂是（）

A.1MNaOHB.20%乙醇C.1MNaClD.0.1MHCl

7.可检测蛋白纯度的方法是（）

A.SDSB.紫外分光光度法C.凯氏定氮法D.比浊法

8.核酸纯化中去除RNA的酶是（）

A.DNaseIB.RNaseAC.蛋白酶KD.逆转录酶

9.冻干工艺的前提条件是（）

A.样品灭菌B.预冻至-40℃以下C.样品浓缩D.除热原

10.纯化偏差的正确处理方式是（）

A.隐瞒记录B.实时记录并评估C.直接调整工艺D.事后补记

三、多项选择题（每题2分，共20分）

1.常用蛋白纯化层析方法包括（）

A.离子交换层析B.疏水相互作用层析C.亲和层析D.凝胶过滤层析E.反向层析

2.缓冲液配制注意事项（）

A.准确称量B.过滤除菌C.调节pHD.新鲜配制E.加防腐剂

3.层析柱维护要点（）

A.控制柱压B.样品过滤C.定期再生D.合适缓冲液保存E.高温灭菌

4.除菌过滤验证内容（）

A.完整性测试B.细菌挑战C.流速测试D.吸附性测试E.热原验证

5.蛋白纯度分析方法（）

A.SDSB.WesternBlotC.HPLCD.毛细管电泳E.质谱

6.核酸纯化常用试剂（）

A.酚-氯仿B.乙醇C.蛋白酶KD.RNaseAE.硅胶柱

7.冻干关键参数（）

A.预冻温度B.升华温度C.解析温度D.真空度E.冻干时间

8.纯化污染物控制措施（）

A.无菌操作B.颗粒过滤C.热原去除D.避免交叉污染E.环境监测

9.GMP纯化记录要求（）

A.实时记录B.可追溯C.签名确认D.完整准确E.事后补记需说明

10.回收率影响因素（）

A.上样量B.洗脱条件C.样品降解D.填料吸附E.检测误差

四、判断题（每题2分，共20分）

1.所有层析都需梯度洗脱。（）

2.缓冲液pH越接近pI，离子交换效果越好。（）

3.除菌滤膜可重复使用。（）

4.回收率越高，产品质量越好。（）

5.层析柱清洗只需NaOH。（）

6.BCA法可测μg/mL级蛋白浓度。（）

7.核酸纯化需去除内毒素。（）

8.冻干前需预冻样品。（）

9.纯化记录可事后补记。（）

10.GMP允许未评估偏差。（）

五、简答题（每题5分，共20分）

1.简述离子交换层析原理及关键操作要点。

2.简述除菌过滤的作用及验证要求。

3.简述层析柱再生方法及注意事项。

4.简述纯化过程内毒素控制措施。

六、讨论题（每题5分，共10分）

1.如何优化蛋白纯化工艺平衡回收率与纯度？

2.层析柱性能下降（峰拖尾、分辨率低）的应对措施？

答案部分

一、填空题答案

1.苯基琼脂糖凝胶（PhenylSepharose）

2.1

3.0.22

4.（回收液目标物总量/上样液目标物总量）

5.NaOH（1MNaOH）

6.Bradford（Lowry）

7.酚-氯仿（蛋白酶K）

8.甘露醇（海藻糖）

9.批次号（产品名称）

10.Ni-NTA

二、单项选择题答案

1.C2.A3.B4.A5.D6.B7.A8.B9.B10.B

三、多项选择题答案

1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCDE5.ABCDE

6.ABCDE7.ABCDE8.ABCDE9.ABCD10.ABCDE

四、判断题答案

1.×2.×3.×4.×5.×6.√7.√8.√9.×10.×

五