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云纹石斑鱼细胞系构建及多领域应用探索

一、引言

1.1研究背景

云纹石斑鱼（Epinephelusmoara）隶属鲈形目、鮨科、石斑鱼属，是一种暖温性海洋底层大型鱼类，主要分布于北太平洋西部，包括越南海域、中国南、东海以及日本、韩国沿海等区域，其适温范围为8-35℃，生长水温在18-27℃。云纹石斑鱼因其肉质鲜美、营养丰富，深受消费者喜爱，在市场上价格不菲，具有较高的经济价值，是海水养殖的重要品种之一。

随着人们对高品质海产品需求的不断增加，云纹石斑鱼的市场需求也日益增长。这促使其养殖业迅速发展，养殖规模逐渐扩大。目前，国内广东、福建沿海地区已相继开展云纹石斑鱼的网箱养殖，山东莱州等地也成功进行了工厂化循环水养殖。例如，在莱州明波养殖基地，选用平均体重50g/尾规格的云纹石斑鱼苗种10万尾，在水温22-25℃、盐度28-31、pH7.8-8.2的水环境条件下，经12个月培育，长成平均体重为0.65kg/尾的商品鱼，平均单尾月增重50g，成活率达93.5%，共收获成鱼9.35万尾，单产49.9kg/m3。

然而，云纹石斑鱼的养殖产业在发展过程中也面临诸多挑战。一方面，病害问题频繁发生，如淋巴囊肿病等，给养殖户带来了巨大的经济损失。由于缺乏对云纹石斑鱼细胞层面的深入研究，在病害防治方面存在一定的盲目性，难以开发出高效的防治措施。另一方面，在遗传育种领域，对云纹石斑鱼的遗传背景和基因功能了解有限，限制了优良品种的培育和选育工作，难以满足养殖产业对生长速度快、抗病力强等优质种苗的需求。

细胞系作为一种重要的体外研究模型，在鱼类研究中具有不可替代的作用。建立云纹石斑鱼细胞系，可以为深入研究其生物学特性提供有力工具。在病毒学研究方面，细胞系可用于病毒的分离、鉴定和增殖，有助于了解病毒的感染机制和致病机理，从而为病害防治提供理论基础。在毒理学研究中，能够通过细胞系评估环境污染物和药物对云纹石斑鱼的毒性影响，为生态环境保护和合理用药提供科学依据。此外，在肿瘤学、生理学以及鱼类种质资源保存与遗传学育种等领域，云纹石斑鱼细胞系也将发挥重要作用，推动相关研究的深入开展，促进云纹石斑鱼养殖产业的可持续发展。

1.2国内外研究现状

在国外，石斑鱼的人工繁育技术研究起步较早，20世纪60年代，鹈川正雄等对赤点石斑鱼的产卵习性及早期生活史进行研究后，日本各地便纷纷开展多种石斑鱼的人工繁殖研究。其中，云纹石斑鱼苗种的规模化繁育技术在2001年于日本三重县水产技术中心取得突破。在细胞系建立方面，国外针对多种鱼类开展了相关研究，建立了众多鱼类细胞系，并将其广泛应用于病毒学、毒理学等领域。然而，对于云纹石斑鱼细胞系的建立，此前却鲜见报道。

在国内，20世纪70年代后期开始对云纹石斑鱼展开研究，早期主要集中在淋巴囊肿病、染色体核型及形态比较等方面。在繁育方面，仅有黄进光等人对云纹石斑鱼的育苗技术进行了初探，但进程相对缓慢。直至近年来，云纹石斑鱼的人工繁育技术才取得一定进展，工厂化循环水养殖等技术也逐渐得到应用和推广。在细胞系研究领域，国内学者已成功建立了多种海水鱼类细胞系。2015年，刘肖峰等以云纹石斑鱼的心脏组织为材料，建立了云纹石斑鱼心脏细胞系（EMH），该细胞系已传至20多代，由成纤维样细胞和上皮样细胞组成。研究还检测了温度及FBS浓度对EMH细胞生长的影响，发现EMH细胞在18-30℃能正常生长，最适生长温度为30℃，在36℃时不能正常生长；FBS浓度在10%-20%时细胞均能快速生长，最适FBS浓度为15%。染色体分析表明，具有正常二倍体染色体数目（2n=48）的细胞所占比例为62%，并且用脂质体法将含增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的质粒载体pEGFP-N3转入EMH细胞后，EGFP成功表达。这一成果为云纹石斑鱼细胞系的研究奠定了基础，但目前关于云纹石斑鱼其他组织来源的细胞系建立及细胞系的广泛应用研究仍有待进一步加强。

总体而言，目前国内外对于云纹石斑鱼细胞系的研究还处于相对初级的阶段，已建立的细胞系种类较少，应用范围也较为有限。在细胞系的建立方法、培养条件优化以及在病毒感染机制、基因功能研究等方面的应用还存在许多空白和不足，亟待深入研究和探索。

1.3研究目的与意义

本研究旨在建立多种云纹石斑鱼组织来源的细胞系，包括心脏、脑、肾脏等组织，并对这些细胞系进行全面的鉴定和特性分析。通过研究不同温度、FBS浓度等因素对细胞生长的影响，优化细胞培养条件，建立稳定、高效的细胞培养体系。同时，利用建立的细胞系开展初步应用研究，如外源基因转染等，探索细胞系在基因功能研究、病毒学研究等领域的应用潜力。