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嗅鞘细胞培养、纯化技术及与胶原纳米支架生物相容性的深度剖析

一、引言

1.1研究背景与意义

神经系统损伤或疾病，如脊髓损伤、脑卒中和神经退行性疾病等，严重威胁人类健康和生活质量，且目前的治疗手段仍存在较大局限性。在中枢神经系统中，神经元再生能力极为有限，受损后往往难以自我修复，导致患者出现不同程度的功能障碍。因此，寻找有效的神经修复策略一直是神经科学领域的研究热点。

嗅鞘细胞（OlfactoryEnsheathingCells，OECs）作为一种特殊的胶质细胞，在神经修复领域展现出了巨大的潜力。OECs分布于嗅觉系统，从嗅上皮基底膜一直延伸到嗅球，其独特之处在于兼具雪旺氏细胞和星形胶质细胞的特性。一方面，它像雪旺氏细胞一样，能够促进轴突的髓鞘化，为轴突生长提供物理支持和营养环境；另一方面，又具备星形胶质细胞对神经元的存活及轴突生长的营养作用，还能够分泌多种神经营养因子，如神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）等，这些因子可以促进神经元的存活、生长和分化，抑制胶质瘢痕的形成，为神经再生创造有利条件。此外，嗅鞘细胞还具有较强的迁移能力，能够沿着损伤的神经通路迁移，引导轴突的再生和延伸。众多研究表明，将嗅鞘细胞移植到受损的神经系统中，可促进神经轴突的再生和髓鞘化，改善神经功能。例如，在脊髓损伤的动物模型中，嗅鞘细胞移植能够促进脊髓神经纤维的再生，部分恢复受损的运动和感觉功能。

然而，要将嗅鞘细胞广泛应用于临床治疗，仍面临诸多挑战。首先，高效的嗅鞘细胞培养和纯化技术是其应用的基础。目前，现有的培养和纯化方法存在细胞产量低、纯度不高、操作复杂等问题，限制了嗅鞘细胞的大规模制备和应用。其次，为了更好地发挥嗅鞘细胞的修复作用，常需要将其与合适的支架材料结合，构建组织工程化的神经修复材料。胶原纳米支架因其独特的纳米结构和良好的生物相容性，在神经组织工程领域受到广泛关注。它能够模拟细胞外基质的结构和功能，为细胞提供物理支撑和生长信号。研究嗅鞘细胞与胶原纳米支架的生物相容性，对于开发新型的神经修复材料具有重要意义。良好的生物相容性可以确保嗅鞘细胞在支架上正常生长、增殖和分化，充分发挥其神经修复功能，同时减少免疫反应和炎症反应的发生。

本研究聚焦于嗅鞘细胞的培养、纯化以及其与胶原纳米支架生物相容性的研究，旨在优化嗅鞘细胞的培养和纯化方法，提高细胞的产量和纯度，为后续的研究和应用提供充足、高质量的细胞来源；深入探究嗅鞘细胞与胶原纳米支架的相互作用和生物相容性，为开发基于胶原纳米支架的神经修复材料提供理论依据和实验基础，有望为神经系统损伤和疾病的治疗开辟新的途径，具有重要的理论意义和临床应用价值。

1.2国内外研究现状

在嗅鞘细胞培养方面，国内外学者进行了大量研究。从取材来源看，主要包括胚胎、新生期和成年动物的嗅球以及嗅粘膜等。不同来源的嗅鞘细胞在培养特性和功能上存在一定差异。例如，胚胎期嗅鞘细胞增殖能力较强，但获取过程涉及伦理问题；成年动物嗅鞘细胞来源相对丰富，伦理争议较小，但培养难度较大。在培养方法上，常用的有酶消化法、机械分离法以及两者结合的方法。酶消化法可使组织分散更充分，但可能对细胞造成损伤；机械分离法对细胞损伤小，但细胞分散效果有时欠佳。此外，为了促进嗅鞘细胞的生长和维持其生物学特性，培养基中通常会添加各种生长因子和营养成分，如Forskolin、牛垂体提取物（BPE）等。

在嗅鞘细胞纯化方面，多种方法被尝试应用。单纯差速贴壁法利用不同细胞贴壁速度的差异来分离嗅鞘细胞，但纯度相对较低。免疫吸附法通过特异性抗体与嗅鞘细胞表面标志物结合，实现细胞的分离和纯化，纯度较高，但成本昂贵且操作复杂。化学药物抑制法利用阿糖胞苷等药物抑制成纤维细胞等杂质细胞的生长，从而提高嗅鞘细胞纯度，但药物可能对嗅鞘细胞的生物学活性产生一定影响。近年来，越来越多的研究倾向于联合使用多种纯化方法，以取长补短，提高嗅鞘细胞的纯度和质量。

关于嗅鞘细胞与支架材料生物相容性的研究，也取得了一定进展。多种支架材料，如壳聚糖、左旋聚乳酸、丝素蛋白等，被用于与嗅鞘细胞的共培养研究。研究结果表明，这些支架材料与嗅鞘细胞具有不同程度的生物相容性，能够支持嗅鞘细胞的黏附、生长和增殖。例如，壳聚糖增强型左旋聚乳酸支架与嗅鞘细胞共培养后，细胞可在支架上存活，细胞毒性评级为Ⅰ级；丝素蛋白纳米纤维与嗅鞘细胞复合培养时，细胞沿丝素纤维分布，形态特征无显著差异，且细胞毒性为1级，无毒。然而，不同支架材料的性能和生物相容性仍存在差异，需要进一步优化和筛选。

尽管国内外在嗅鞘细胞培养、纯化及与支架材料生物相容性方面取得了一定成果，但仍存在一些问题和挑战。如现有的培养和纯化方法仍需进一步优化，以提高细胞产量和纯度，降低成本；对于嗅鞘