热考专题提分练(第九单元热考微专题(十)PCR技术及鉴定).docxVIP

热考专题提分练

(30分钟37分)

一、选择题:本题共5小题,每小题3分,共15分。

1.下图为X蛋白基因的碱基序列,所示序列为引物结合的部分,扩增X蛋白基因所需的引物序列是()

①5-ATGCCGTAAGTCCTAC-3

②5-GTAGGACTTACGGCAT-3

③5-TGTAAGCCGTAGATCA-3

④5-TGATCTACGGCTTACA-3

A.①② B.②③ C.①④ D.③④

【解析】选C。DNA双链中,-端为5端,HO-端为3端,引物与模板链的3端互补配对结合,所以图示基因序列左侧引物应为①,右侧引物应为④,C正确。

2.如图表示PCR过程中某个阶段反应体系的情况,①②③④表示相关物质,L、R表示方向。下列叙述正确的是 ()

A.②链从L到R的方向为3→5,①②链均可作为子链合成的模板

B.PCR过程需要通过解旋酶断开氢键,且为边解旋边复制

C.以1个DNA为模板经3次循环需消耗8个引物③

D.物质③的5端添加了某序列,至少需经2次循环才可获得该序列的等长双链产物

【解析】选D。根据DNA分子中两条链的反向平行关系可判断,②链从L到R的方向为5→3,A错误;PCR过程是通过高温将双链DNA之间的氢键断开,并且是全部解旋之后才进行复制,B错误;以1个DNA为模板经3次循环产生的DNA分子数目为23=8,则需消耗引物③的数目为(8×2-2)÷2=7,C错误;由于引物④的5端与②链3端平齐,所以物质③的5端添加了某序列,至少需经2次循环才可获得两条脱氧核苷酸链等长的双链DNA产物,D正确。

3.大引物PCR定点突变常用来研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变仅需进行两轮PCR即可获得,第一轮加诱变引物和侧翼引物,第一轮产物作为第二轮PCR扩增的大引物,过程如图所示。下列叙述正确的是 ()

A.第一轮PCR过程中复性所用的温度与第二轮PCR复性的温度是一样的

B.PCR扩增的定点诱变产物通常需要连接到载体分子上才能表达出相应的性状,该定点诱变产物需具备启动子、终止子等结构才能进行转录和翻译

C.第二轮PCR所用的引物是第一轮PCR的产物DNA的两条链

D.将某功能蛋白的第17位半胱氨酸(UGU)改造成丝氨酸(UCU),属于蛋白质工程

【解析】选D。为了使两轮PCR在同一支试管中进行,引物设计时应考虑不同的复性温度,第二轮PCR因引物较长,引物更容易与模板链结合,第二轮复性温度应该比第一轮高,A错误;若要使目的基因可以表达出蛋白质,则载体上需要具备启动子和终止子等结构才能进行转录和翻译,B错误;除第一轮产物作为第二轮PCR扩增的大引物外,第二轮PCR仍需加入的引物是另一种侧翼引物,以便进行另一条链的延伸,C错误;将某功能蛋白的第17位半胱氨酸(UGU)改造成丝氨酸(UCU),属于蛋白质工程,D正确。

【加固训练】

常规PCR只能扩增两引物之间的DNA序列,要扩增已知DNA序列两侧的未知DNA序列,可用反向PCR技术。反向PCR技术扩增的原理如图所示。下列叙述错误的是 ()

A.酶切阶段,L中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列

B.环化阶段,可选用E.coliDNA连接酶或T4DNA连接酶

C.图中引物,应选择引物1和引物4,且二者间不能互补配对

D.PCR扩增,将温度调至72℃左右的目的是使引物与模板链结合

【解析】选D。在酶切阶段,已知序列L中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列,不然会将已知序列L切断,造成序列识别混乱,A正确;T4DNA连接酶或E.coliDNA连接酶都可以用来连接黏性末端,因此环化阶段,可选用E.coliDNA连接酶或T4DNA连接酶,B正确;PCR过程需要两种引物,能分别与目的基因两条链的3端通过碱基互补配对结合,为保证延伸的是已知序列两侧的未知序列,应该选择引物1和引物4,且二者间不能互补配对,C正确;PCR扩增中,将温度调至72℃左右的目的是使耐高温的DNA聚合酶将四种脱氧核苷酸,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链,D错误。

4.某科研小组采用PCR技术构建了红色荧光蛋白基因(dsred2)和α-淀粉酶基因(amy)的dsred2-amy融合基因,其过程如图所示,其中引物②和引物③中部分序列(黑色区域)可互补配对。下列说法错误的是 ()

A.利用PCR技术扩增目的基因时不需要解旋酶来打开DNA双链

B.不能在同一反应体系中进行dsred2基因和amy基因的扩增

C.dsred2基因和amy基因混合后只能得到一种类型的杂交链

D.杂交链延伸得到dsred2-amy融合基因的过程不需要加引物

【解析】选C。

A

利用PCR技术扩增目的基因时,高温变性使DNA双链解旋,不需要解旋酶来打开DNA