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高考生物遗传工程复习讲义与练习题

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高考生物遗传工程复习讲义与练习题

遗传工程，又常被称为基因工程或重组DNA技术，是现代生物技术的核心内容，也是高考生物的重点与难点。它如同在分子水平上进行“外科手术”，对生物体的基因进行定向改造，从而赋予其新的遗传特性。本讲义将带你系统梳理遗传工程的核心知识，并通过练习题巩固提升。

一、遗传工程的概念与核心

1.1概念

遗传工程指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。其操作对象通常是基因，最终目标是获得具有特定性状的个体或产物。

1.2核心思想

遗传工程的核心在于“剪切”、“拼接”、“导入”和“表达”。即从某种生物（供体）中提取目的基因，在体外与适当的载体结合形成重组DNA分子，然后将重组DNA分子导入到另一种生物（受体）的细胞内，使之在受体细胞中复制、转录和翻译，从而表达出供体基因所控制的性状。

二、遗传工程的理论基础与技术支撑

2.1理论基础

遗传工程得以实现，离不开坚实的理论基础：

*DNA是主要的遗传物质：这为基因的体外操作提供了物质基础。

*DNA的双螺旋结构和半保留复制机制：阐明了遗传信息的传递方式，为DNA的体外复制和重组奠定了理论基础。

*遗传密码的通用性：几乎所有生物共用一套遗传密码，使得一种生物的基因能够在另一种生物体内表达。

*基因的基本结构和功能单位：人们对基因的结构（如启动子、终止子、编码区等）和功能的认识，使得定向改造基因成为可能。

2.2技术支撑

遗传工程的操作依赖于一系列关键技术和工具酶：

*限制性核酸内切酶（限制酶）：基因的“剪刀”。能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列（限制酶切点），并切割磷酸二酯键。限制酶主要从原核生物中分离纯化获得，其作用是保护细菌自身DNA不被外来噬菌体DNA所降解。

*DNA连接酶：基因的“针线”。能够将两个DNA片段的末端通过磷酸二酯键连接起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。常用的有E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。

*载体：基因的“运输车”。将目的基因导入受体细胞的工具。常用的载体有质粒（细菌中独立于拟核DNA的小型环状DNA分子，能自主复制）、噬菌体、动植物病毒等。作为载体，需要具备以下条件：能在宿主细胞内稳定保存并自我复制；具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因（如抗性基因），便于筛选含有重组DNA的细胞。

*聚合酶链式反应（PCR）技术：一种在体外快速扩增特定DNA片段的技术。需要模板DNA、引物、TaqDNA聚合酶（耐高温）和脱氧核苷酸等条件。PCR技术极大地简化了目的基因的获取过程。

*基因枪法、农杆菌转化法、显微注射技术等：将重组DNA分子导入受体细胞的方法，根据受体细胞的类型（植物、动物、微生物）选择不同的导入方法。

三、遗传工程的基本操作程序

遗传工程的基本操作流程可以概括为以下几个主要步骤，这些步骤相互关联，缺一不可。

3.1获取目的基因

目的基因是指人们所需要的特定基因，如编码某种蛋白质的基因、抗性基因等。获取目的基因的方法主要有：

*从基因文库中获取：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。从中可以筛选出所需的目的基因。

*利用PCR技术扩增目的基因：如果目的基因的核苷酸序列已知，或者有相关的mRNA序列信息，可以通过PCR技术大量扩增目的基因。

*人工合成：如果基因比较小，且核苷酸序列已知，也可以通过DNA合成仪直接人工合成。

3.2构建基因表达载体

获取目的基因后，需要将其与载体连接，构建成重组DNA分子（基因表达载体）。这是遗传工程的核心步骤。一个基因表达载体除了目的基因外，还必须包含：

*启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。

*终止子：位于基因的尾端，使转录在所需要的地方停止。

*标记基因：用于鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素抗性基因。

构建过程中，需用同一种（或能产生相同黏性末端的）限制酶切割目的基因和载体，再用DNA连接酶将两者连接起来。

3.3将目的基因导入受体细胞

基因表达载体构建完成后，需要将其导入受体细胞（宿主细胞）。常用的导入方法有：

*导入植物细胞：农杆菌转化法（最常用，适用于双子叶植物和裸子植物）、基因枪法、花粉管通道法。

*导入动物细胞：显微注射技术（最常用，将基因表达载体注射到受精卵中）。

*导入微生物细胞：