第九单元第55讲基因工程的基本工具和基本操作程序.docxVIP

第55讲基因工程的基本工具和基本操作程序

课程标准解读

知识网络概览

【课标要求】

1.阐明重组DNA技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。

2.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定等步骤。

3.按照实验操作步骤,进行DNA的粗提取与鉴定实验。

【能力要求】

1.理解能力:运用模型与建模的方法理解基因表达载体的结构。

2.解决问题的能力:基于对限制酶的特点和质粒的结构分析,构建合适的基因表达载体。

考点一基因工程的基本工具

【精梳攻教材】

1.基因工程概述:

(1)基因工程概念:

(2)理论基础:

2.重组DNA技术的基本工具:

(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”):

【名师点睛】

同尾酶

切割DNA分子可以产生相同末端的两种不同的限制酶为同尾酶,由同尾酶切割产生的DNA片段末端可以连接。

(2)DNA连接酶:

常用类型

E.coliDNA连接酶

T4DNA连接酶

来源

大肠杆菌

T4噬菌体

功能

将双链DNA片段拼接起来,恢复被限制酶切开的磷酸二酯键,形成重组DNA。

但E.coliDNA连接酶连接具有平末端DNA片段的效率要远远低于T4DNA连接酶。

(3)载体:

(4)五种酶比较:

酶种类

作用底物

作用部位

作用结果

限制酶

DNA分子

磷酸二酯键

将DNA切成两个或多个片段

DNA

连接酶

DNA分子片段

磷酸二酯键

将两个DNA片段连接为一个DNA分子

DNA

聚合酶

脱氧核苷酸

磷酸二酯键

以DNA单链为模板,将单个脱氧核苷酸依次连接到另一条短的单链3端

解旋酶

DNA

分子

碱基对中的氢键

将双链DNA分子局部解旋为单链,形成两条长链

DNA

水解酶

DNA分子

磷酸二酯键

将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸

【自测强化】

1.辨易错

(1)限制性内切核酸酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具酶。(×)

分析:限制性内切核酸酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具,前两者属于工具酶,质粒属于载体。

(2)限制性内切核酸酶识别序列越短,则该序列在DNA中出现的概率就越大。(√)

(3)DNA连接酶可以连接目的基因与载体的氢键,形成重组DNA。 (×)

分析:DNA连接酶可以将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。

(4)质粒通常采用抗生素合成基因作为标记基因。 (×)

分析:质粒上的标记基因通常是抗生素抗性基因,而不是抗生素合成基因。

(5)质粒上常有特殊的标记基因,以便于重组DNA分子的筛选。 (√)

2.练表达

(1)(选择性必修3P71“旁栏思考”拓展)原核生物中存在限制酶的意义是:切割外源DNA以保证自身安全。

(2)(选择性必修3P74“拓展应用”T1)限制酶来源于原核生物,不切割自己的DNA分子的原因:原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

【精练提能力】

1.(2024·湖南高考)某同学将质粒DNA进行限制酶酶切(切割)时,发现DNA完全没有被酶切(切割),分析可能的原因并提出解决方法。下列叙述错误的是 ()

A.限制酶失活,更换新的限制酶

B.酶切条件不合适,调整反应条件如温度和酶的用量等

C.质粒DNA突变导致酶识别位点缺失,更换正常质粒DNA

D.酶切位点被甲基化修饰,换用对DNA甲基化不敏感的限制酶

【解析】选B。本题考查DNA重组技术的基本工具和基因表达。限制酶失活会使DNA完全不被酶切(切割),此时应更换新的限制酶,A正确;酶切条件不合适通常会使切割效果下降,此时应有部分DNA被酶切,这与题干信息相矛盾,B错误;质粒DNA突变会导致限制酶识别位点缺失,进而造成限制酶无法进行切割,应更换为正常质粒,C正确;质粒DNA上酶切(切割)位点被甲基化修饰,会导致对DNA甲基化敏感的限制酶无法进行酶切,应换用对DNA甲基化不敏感的限制酶,D正确。

2.(不定项)(2025·山东省实验中学模拟)由于PCR扩增出的目的基因末端为平末端,且无合适的限制酶识别序列,需借助中间载体P将目的基因接入载体E。下图为两种载体的结构和相关限制酶的识别序列,下列叙述错误的是 ()

A.构建重组载体P时,应选择EcoRⅤ进行酶切,再用T4DNA连接酶连接

B.为了便于该目的基因接入载体E,可用限制酶EcoRⅤ或SmaⅠ切割载体P

C.载体P不能作为基因表达载体,是因为它不含起始密码子和终止密码子

D.若受体细胞表现出抗性基因的相应性状,表明重组载体成功导入受体细胞

【解析】选B、C、D。由于载体E只有产生黏性末端的酶切位点,要使中间载体P接入载体E,同时防止载体E自身环化,需要用两种限制酶分别切割载体E和中间载体P