浅谈核酸检测实验室防污染措施.pdfVIP

浅谈核酸检测实验室防污染措施

血站开展核酸检测是保证血液安全的重要举措。气溶胶污染是核酸检测过

程中最主要且最常见污染，也是困扰绝大多数实验室的一个难题，如果不加以重

视，气溶胶会污染整个实验室，严重时可导致实验室不能正常运行。该文在核酸

检测防污染方面进行初步总结。

标签：防污措施；核酸检测；气溶胶污染

到2015年，血液核酸筛查检测基本覆盖全国[1]。核酸检测反应的最大特点

是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但在操作过程中易受到污染，极其微量的

污染即可造成假阳性的产生。该站核酸实验室运行至今已完成了将近27万人次

的核酸样本检测，在核酸检测防污染方面积累了一定的工作经验，现报道如下。

1布局合理的实验室是保证实验能正常进行的前提

该站核酸实验室按工作需要分为：试剂储存区（一区）、样本处理区（二区）、

扩增区（三区），各区均设有缓冲间。各区在空间上完全独立，不能相通。各区

有独立的通风系统，一、二、三区压力依次递减，一区、二区保持正压，三区保

持负压状态，各区间压差≥5Pa，二区、三区可适当加大压差。进风口和出风口

不能设在建筑的同一平面，要避免排出的空气被重新吸进实验室。各区域只用于

特定的操作，工作衣和清洁消毒物品不得跨区混用，实验室人员和物品应按照从

一区→二区→三区的单向工作流向制度，不得逆向流动。

2质量控制

实验室应建立合理、科学的室内质控标准操作规程（SOP），根据检测模式

的不同选择不同的质控方法和质控规则，且质控应从样本处理到报告发放全程参

与，对每一批检测至少设立一组质控品，并包括至少一个弱阳性室内质控品。

2.1人员和培训

真正决定工作质量的关键是人。防污染的关键是工作人员安全的操作行为和

严格执行标准操作规程。实验室人员配备应该符合核酸检测工作量的要求，岗位

设置与选择的检测系统和检测策略配合一直，工作人员需要通过相关的质量管理

规范要求，定期参加核酸检测技术培训并合格，定期为实验室人员进行时长不低

于1W的核酸理论和实际操作专项培训。

2.2试剂的储存

相对于酶免疫试剂，核酸检测试剂种类多样，且对温度敏感，分别要求于

-20℃、-4℃～8℃及常温25℃环境中，故在接收试剂时需要对其进行严格的运输

温度检查以及到货是质量检查，确认不同种类试剂在运输过程中的温度控制是否

满足说明书要求，试剂是否有破损，是否存在外包装标识或者条码不完整等情况。

在储存时，试剂储存区仅用于核酸试剂和耗材的存储，是核酸扩增实验室最为“洁

净”的区域，不应有任何核酸的存在。核酸质控品和试剂盒中的阳性对照不能进

入试剂储存区，可存放于样本处理区冷冻保存[2]。

2.3标本的采集

在影响血液筛查结果的众多因素中，标本因素是首要的[3]。用于核酸检测

实验的采血管必须采用无菌、无DNA酶、无RNA酶、带惰性分离胶、一次性

使用的EDTA-K2抗凝真空采血管，采血管应无裂痕，无渗漏[4]。标本采集过程

中若遇采血管负压不足，应更换一支采血管重新留样，标记后两管同时送检。严

禁开帽留样，以防外界酶及抑制物进入标本，影响检测结果。

2.4样本的处理

①尽量减少开盖样本在实验室环境中的暴露时间。实验开始前在生物安全柜

或正压环境中使用全自动开盖系统或手工开盖，加样结束后，立即使用一次性使

用的硅胶塞或试管帽对样本密封，避免未知核酸阳性样本对阴性样本的污染，从

而影响拆分结果。

②实验过程中避免在已开盖的样本上方活动，以免抑制物进入标本，导致假

阴性。

③检测后核酸样本放置在冰箱指定位置暂存，经高压蒸汽灭菌器消毒处理后

按医疗废物處置。

2.5阴、阳性对照和质控品的配制

设立阴、阳性对照有利于监测反应体系各成份的污染情况。但阳性对照和质

控品在核酸提取设备中混匀、振荡时会产生气溶胶或液滴溅出，成为潜在的污染

源。核酸实验室阴、阳性对照的配制及质控标准品的复融、混匀、开盖均应在生

物安全柜中进行。为防止阳性对照和质控品对标本造成污染，应在标本全部上机

后，再配制阴、阳性对照和质控品[5]。阳性对照及质控品复融后应先确认各管

帽已拧紧，上下颠倒混匀时液体不会溅出或漏出，混匀后离心，把管壁和管帽上

的液体收集于管底，防止开盖时液体溅出污染生物安全柜。开盖后在生物安全柜

内静置5s以上，待管内产生的气溶胶经生物安全柜抽滤清除后再转移至样