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精米中谷蛋白含量的测定考马斯亮蓝法

Determinationofglutelincontentinpolishedrice-Coomassiebrilliantbluemethod

2026-02-13发布2026-02-13实施

中国出入境检验检疫协会发布

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精米中谷蛋白含量的测定

考马斯亮蓝法

1范围

本文件描述了精米中谷蛋白含量的考马斯亮蓝测定方法。

本文件适用于精米中谷蛋白含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

谷蛋白glutelin

含于稻米中，溶于稀酸或稀碱但不溶于纯水、中性盐溶液、乙醇的储藏蛋白质的总称。

3.2

精米polishedrice

稻谷脱壳后形成的糙米经碾米加工，去除大部分糠层和胚芽后，主要以胚乳制成的成品粮。

4方法提要

精米粉碎过筛后经去离子水、5%氯化钠溶液、70%乙醇洗涤，经0.04mol/L氢氧化钠溶液提取后，得到纯度较高的谷蛋白，在595nm波长下采用考马斯亮蓝法G-250测定谷蛋白含量。

5设备和试剂

5.1设备

5.1.1粉碎机。

5.1.2高速离心机：转速不低于4000r/min。

5.1.3恒温磁力搅拌器：可控温度不低于60℃。

5.1.4紫外可见分光光度计：波长范围190nm-900nm。

5.1.5标准检验筛：孔径为100目、120目。

5.1.6具塞离心管：10mL、15mL、100mL。

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5.1.7涡旋混匀仪。

5.1.8分析天平：感量为0.01g、0.0001g。

5.1.9恒温水浴锅。

5.2试剂

除另有规定，所用试剂均为分析纯，试验用水需符合GB/T6682中二级水的规定要求。

5.2.1去离子水

5.2.2石油醚。

5.2.3氯化钠。

5.2.4无水乙醇。

5.2.585%磷酸。

5.2.6氢氧化钠。

5.2.7考马斯亮蓝G-250。

5.2.895%乙醇。

5.2.9牛血清白蛋白：CAS:9048-46-8，纯度大于等于98.0%。

5.3溶液配制

5.3.170%乙醇：量取70mL无水乙醇，加水稀释至100mL。

5.3.20.01%考马斯亮蓝G-250溶液：称取0.1000g考马斯亮蓝G-250，溶于50mL95%乙醇中，加入85%的磷酸100mL，用去离子水定容至1L，混匀过滤，于棕色瓶中保存。

5.3.30.04mol/L氢氧化钠溶液：称取0.16g氢氧化钠溶于适量去离子水中，稀释至100mL。

5.3.45%氯化钠溶液：称取5.00g氯化钠溶于适量去离子水中，稀释至100mL。

5.4标准溶液配制

0.1mg/mL标准蛋白质溶液：精密称取牛血清白蛋白0.0100g，加0.04mol/L氢氧化钠溶液溶解并定容至100mL，超声5min至溶解完全，即为0.1mg/mL标准蛋白质溶液。标准溶液建议现配现用，或4℃下避光保存1-3d。

6分析步骤

6.1样品的制备

使用粉碎机将精米样品粉碎后过120目筛，过筛后的样品和石油醚按照1:4（W/V）混合，室温下脱脂6h，弃去石油醚后，置于通风橱下过夜风干，收集粉末样品过100目筛，于干燥皿中储存备用。

6.2样品中谷蛋白的提取

6.2.1去离子水洗涤

称取2.0g脱脂过筛的样品粉末于100mL烧杯中，加入40mL去离子水，置于装有60℃去离子水的大烧杯中水浴加热，同时大烧杯置于恒温磁力搅拌器上搅拌30min，搅拌完成后转移至50mL离心管内，6000r/min离心10min，弃去上清液后重复提取1次，沉淀备用。

6.2.25%氯化钠溶液洗涤

向上述含沉淀的离心管中分多次加80mL5%氯化钠溶液，涡旋2min至沉淀溶解分散后转移至

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100mL烧杯内，烧杯置于装有60℃去离