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浙江大学学报（农业与生命科学版）51（5）：743~753，2025

JournalofZhejiangUniversity(Agric.LifeSci.)

https：///agr

E-mail：zdxbnsbDOI：：10.3785/j.issn.1008-9209.2025.05.191

圩猪不同耐冻性精液的外泌体微RNA表达谱分析

1†2†222222*2*

涂小璐，李浩南，王琪，王钥萱，许安邦，冯嘉晶，宋勇康，张运海，曹祖兵

（1.安徽省畜禽遗传资源保护中心，安徽合肥230091；2.安徽农业大学动物科技学院，地方畜禽遗传资源保护与种质创新安徽省重点实验室，

安徽合肥230036）

摘要为探究安徽省濒危地方猪种圩猪精液耐冻性差异的分子机制，采集15头圩猪精液进行冷冻保存，以解冻后精

子活力高于60%、相对精子活力高于0.75的样本作为高耐冻性组，以解冻后精子活力低于45%、相对精子活力低于

0.56的样本作为低耐冻性组，从2组中各选取3头圩猪，采集鲜精液，分离精清并提取外泌体。通过透射电镜和纳米

颗粒粒径分析鉴定外泌体，并对外泌体微RNA（microRNA,miRNA）进行测序分析。结果表明，2组圩猪精浆外泌体

形态和粒径无明显差异，均呈圆盘状且粒径在30～150nm之间。miRNA测序共鉴定出287个已知miRNAs，其中

ssc-miR-1在2组间的表达差异显著（P＜0.05）。预测ssc-miR-1的靶基因共12011个。对这些靶基因进行基

因本体（geneontology,GO）及京都基因和基因组数据库（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes,KEGG）分

析，分别获得：1）60条富集显著的KEGG通路，包括脂肪酸代谢通路、磷脂酰肌醇信号系统通路等；2）8条富集显

著的GO通路，其中细胞组分包括细胞骨架、细胞膜皱褶等，分子功能包括蛋白激酶活性、磷酸转移酶活性等。通

过对本试验发现的已知miRNA与同批次试验发掘出的精清差异代谢物进行关联分析发现：ssc-miR-1与D-阿拉

伯糖醇、D-来苏糖等多个代谢物显著相关；ssc-let-7d、ssc-miR-107与1-甲基-L-组氨酸等代谢物具有显著相关

性。综上所述，圩猪精浆外泌体中差异表达的miRNA可作为精液耐冻性相关的潜在生物标志物，为圩猪精液冷

冻技术工艺的优化提供了理论依据。

关键词耐冻性；精子活力；外泌体；微RNA

中图分类号S814文献标志码A

引用格式涂小璐,李浩南,王琪,等.圩猪不同耐冻性精液的外泌体微RNA表达谱分析[J].浙江大学学报(农业与生

命科学版),2025,51(5):743-753.DOI:10.3785/j.issn.1008-9209.2025.05.191

TUXiaolu,LIHaonan,WANGQi,etal.ExosomalmicroRNAexpressionprofilingofsemenwithdifferentfreezing

toleranceinpolderpigs[J].JournalofZhejiangUniversity(AgricultureandLifeSciences),2025,51(5):743-753.

ExosomalmicroRNAexpressionprofilingofsemenwithdifferentfreezing

toleranceinpolderpigs

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TUXiaolu,