CN106614520A 一种植物线虫永久玻片的制作方法 （宁波检验检疫科学技术研究院）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN106614520A

(43)申请公布日2017.05.10

(21)申请号201611073300.8

(22)申请日2016.11.29

(71)申请人宁波检验检疫科学技术研究院

地址315000浙江省宁波市鄞州区惠康路8

号

(72)发明人顾建锋何洁刘乐乐陈先锋段维军

(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569代理人王加贵

(51)Int.CI.

A01N1/00(2006.01)

权利要求书1页说明书4页

(54)发明名称

一种植物线虫永久玻片的制作方法

(57)摘要

CN106614520A本发明涉及植物线虫标本制作技术领域，公开了一种植物线虫永久玻片的制作方法，包括以下步骤：a、将线虫温浴后离心，用固定液在室温下浸泡24h以上；b、将固定后的线虫中加入甘油水溶液，置于35℃~40℃恒温放置40h～50h,得到完全脱水浸泡于甘油中的线虫；c、在载玻片上滴加甘油，将线虫移至载玻片的甘油滴中，在甘油滴两边放蜡块，加盖玻片，加热至蜡块融化后冷却，贴上标签。本发明简化了永久玻片制作的

CN106614520A

CN106614520A权利要求书1/1页

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1.一种植物线虫永久玻片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、将含有线虫的水溶液在55-60℃温浴2-3min后离心，分离水层得到线虫液，将所述线虫液在固定液中浸泡24h以上；

b、将含有线虫的固定液离心，分离上层固定液得到固定后的线虫，将固定后的线虫与1~5ml甘油水溶液混合置于24孔细胞培养皿中，再将所述培养皿在35℃~40℃条件下恒温放置40h～50h,得到完全脱水浸泡于甘油中的线虫；其中，所述甘油水溶液包括体积比为1:15～25的甘油与水；

c、在载玻片上滴加甘油，将所述完全脱水浸泡于甘油中的线虫移至载玻片的甘油滴中，在甘油滴两边放蜡块，加盖玻片，加热至蜡块融化后冷却。

2.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述固定液包括体积比为5～15:1~5:65～94的40wt%甲醛、甘油和水。

3.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤a或步骤b中，所述离心的转速独立地为2000～4000r/min,离心时间独立地为1～5min。

4.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤c中，移至甘油滴中央的线虫为已完全脱水的雌、雄线虫各若干条，排列均匀。

5.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤c中，所述加热步骤具体为，将含有蜡块的玻片置于50～70℃的加热板上加热。

6.根据权利要求1或5所述的制作方法，其特征在于，步骤c中，所述加热的时间为20~40s。

7.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤c中，还包括将所述冷却后的玻片贴上标签，所述标签上包括样品号、寄主、产地、制作日期。

CN106614520A说明书1/4页

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一种植物线虫永久玻片的制作方法

技术领域

[0001]本发明涉及植物线虫标本制作技术领域，具体为一种植物线虫永久玻片的制作方法。

背景技术

[0002]植物线虫属于无脊椎动物中的线虫门，能寄生于植物根、茎、叶、果实、种子等部位，其种类繁多、危害严重。据不完全统计，全世界每年因植物线虫造成的农林作物经济损失在数千亿元以上。我国2007年公布的对外植物检疫性有害生物名录中，有20种(属)的线虫为检疫性线虫，其实际种数多达200种以上。

[0003]在植物线虫检测鉴定研究工作中，一般首先必须制作临时玻片，对线虫的形态结构进行初步观察和摄影，并对各种数据进行测计。随后，需进一步将样品制成永久玻片，作为实验室的实物标本，可作为检疫实验室的截获证据，也可供教学或科研需要，尤其对鉴定的新种，必须要求有模式标本。

[0004]一般线虫永久玻片制作过程较为复杂，制作步骤多，涉及标本的杀死、固定、脱水、制片等步骤。而且需耗时较长，一般需要5～6周。公开号为CN102640742A的中国专利公开了一种对传统的永久玻片制作方法改进的技术方案，但该方案仍需用2种脱水液，且用时需20天左右。

发明内容

[0005]针对现