一株新茂源链霉菌TGase的表征及改造.pdfVIP

摘要

谷氨酰胺转氨酶（Transglutaminase，TGase，EC2.3.2.13）普遍存在于动植物及

微生物中，作为一种催化酰基转移的关键酶类，在食品加工领域展现出显著的应用

价值。与动植物来源的TGase相比，微生物来源的TGase易于规模化生产和基因工

程改造，具备广泛的工业应用潜力。然而，微生物源TGase目前仍面临稳定性差和

产量低的挑战，迫切需要挖掘具有更高活性和稳定性的新型微生物TGase以满足工

业需求。

本研究基于茂源链霉菌（Streptomycesmobaraensis）CGMCC4.1851（菌株

XM4），通过发酵验证发现XM4为可产TGase菌株，其最高酶活为3.97U/mL，高

于目前所报道原始茂源链霉菌活性。进一步酶学性质分析表明：该酶最适pH为10.0，

最适温度为50℃，最大比活力为9.93U/mg。在pH4～11范围内孵育2h仍有70%

以上相对酶活，同时其热稳定性较好，与工业菌TGase水平相当。此外，通过研究

金属离子对TGase的影响表明1mM的Zn2+、Mn2+、Fe3+分别使酶活力降低了

38.76%、19.62%和67.2%，5mM的Zn2+、Cu2+、Mn2+、Fe3+分别降低了91.5%、

+

97.09%、53.64%和83.98%的酶活力，5mM的Na提高了3.4%的酶活力。酶动力

学分析表明，XM4菌TGase的Km值为56.62mM，Vmax为0.182µmol/mL/min，

kcat/Km为431(s-1M-1)。TGase与酪蛋白的交联实验表明，在40℃和50℃时，TGase

交联速度分别为20min和15min，交联速率远高于工业化TGase。

为进一步提高TGase的生产效率，通过替换核糖体结合位点（RBS）对XM4菌

TGase进行基因工程改造，最终得到SR41改造菌株。通过发酵验证分析了基因工程

改造对XM4菌TGase的产量影响。结果表明，工程菌株SR41的TGase酶活达到

8.07U/mL，与原始TGase产量相比提高了2倍。同时，通过SR41优化后的表达系

统，仅需24h就可以完成Pro-TG的有效转化，明显缩短了发酵周期。

本论文深入研究了茂源链霉菌XM4产生的TGase的酶学特性及其最佳应用条件，

并通过基因工程技术成功实现了该酶的高效表达。研究结果表明工程菌株SR41的构

建对提高TGase的生产效率及降低生产成本具有应用价值和指导意义。

关键词：茂源链霉菌，谷氨酰胺转氨酶，酪蛋白交联，酶学特性

万方数据

ABSTRACT

Transglutaminase(TGase,EC2.3.2.13)isubiquitouslyfoundinanimals,plants,and

microorganisms,servingasacrucialenzymethatcatalyzesacyltransferreactions,

demonstratingsignificantapplicationvalueinthefoodprocessingindustry.Comparedto

TGasederivedfromanimalandplantsources,microbial-sourcedTGaseismoreamenable

toscale-upproductio