基因工程原理重组基因导入受体细胞.pptVIP

基因工程原理;DNA重组（限制性内切酶）

运输工具——基因克隆载体

目的基因的制备

目的基因导入受体细胞

外源基因的表达

基因工程的应用;第五章重组基因导入受体细胞;第一节受体细胞;1.原核受体细胞

较为理想的受体细胞：

大部分没有细胞壁，便于外源DNA进入

没有核膜，染色体DNA没有固定结合的蛋白质

基因组简单，不含线粒体、质体

多为单细胞，容易获得一致性材料，易于扩大培养或发酵生长

常用细菌：大肠杆菌。;大肠杆菌。;

酵母菌表达系统的优势：

结构最为简单的真核生物之一，基因表达调控机理比较清楚，遗传操作简单

培养简单

遗传稳定性高，易于扩大培养或发酵生长

安全性高，无致病性，不会对外界环境造成污染

具有较好的转译后加工机制，便于真核生物表达;3.植物受体细胞

优点：真核细胞、细胞的全能性。

4.动物细胞

受体细胞包括：小鼠BHK细胞、中国仓鼠卵巢细胞CHO，猴肾细胞等

受体动物：鼠、牛、羊、鱼等

;第二节重组基因导入受体细胞;转化（transformation）——重组质粒DNA分子进入受体细胞，并在受体细胞稳定维持和表达的过程，转化后的受体菌，称转化子。;;（二）转导;D突变;（三）转染;（四）电激穿孔;（五）三亲本杂交（triparentalmating）;第十七页，共九十六页。;二、重组基因导入植物受体细胞;（Vir区）;限制性酶

切开;（1）叶盘法转