第七章DNA体外重组与基因转移总结.pptVIP

第七章DNA体外重组与基因转移;;一、DNA的体外重组（切与接）;1.同种内切酶生产的粘性末端的连接;2.同尾酶生产的粘性末端的连接;3.不同粘性末端的连接;4.人工粘性末端的连接（1）5′突出末端;4.人工粘性末端的连接（2）3′突出末端;4.人工粘性末端的连接（3）平头末端;5.粘性末端的更换;6.重组率;重组率;重组率;二、重组DNA分子的转化和扩增（转与增）;;;;（2）细菌原生质体的转化;不同细菌的原生质体制备方法不尽相同，以链霉菌为例：细菌需生长在高渗培养基中（如34%的蔗糖溶液，并加入甘氨酸以增加细菌细胞壁对溶菌酶的敏感性。在制备过程中，菌体应始终悬浮在10.3%的蔗糖等渗溶液中。与原生质体接触的所有器皿应保持无水无去污剂;取0.2-1ml的原生质体悬浮液（108-109个原生质体），加入10-20mlDNA重组连接液，同时加入含有PEG1000和Ca2+的等渗溶液，混匀;（3）l噬菌体DNA的转染;（4）电穿孔转化;2.转化率;例如，pUC18对大肠杆菌的转化率为108，即每微克pUC18中只有108个分子能进入受体细胞。一微克pUC18共有3.4X1011个分子（6.02X1017/2686X660），也就是说，每3400个pUC18分子才有一个分子进入受体细胞

另一方面，在实际操作过程中