第五章分子生物学研究方法(上).pptVIP

第五章分子生物学研究方法

DNA、RNA及蛋白质操作技术;;5.1重组DNA技术回顾——三大成就：

1、20世纪40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题；

（1928FrederickGriffith1944OswaldAveryTransformationofStreptococcuspneumoniae）;2、50年代揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题。;但是：如果没有分离和富集单一DNA分子的技术，科学家就无法对这类物质进行直接的生化分析。;仅仅能在体外利用限制性核酸内切酶和DNA连接酶进行DNA的切割和重组远不能满足基因研究的需要。

DNA片段在体外不具备自我复制能力，要想得到足够量和足够纯度的DNA，必须将它们连接到具备自主复制能力的DNA分子上（载体上），并转入寄主细胞中进行繁殖。这就是基因克隆或分子克隆。;1970年，Mandel和Higa发现，大肠杆菌细胞经适量氯化钙处理后，能有效地吸收λ噬菌体DNA。

1972年，Cohen等人又报道，经氯化钙处理的大肠杆菌细胞同样能够摄取质粒DNA。

从此，大肠杆菌就成了分子克隆中最常用的转化受体。;5.2DNA基本操作技术?;1、