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2025年高三生物发酵工程实践题

一、菌种选育与优化实验设计

（一）高产纳豆菌的分离纯化

某研究小组欲从A、B、C三个地区的市售纳豆中选育性能优良的纳豆菌（枯草芽孢杆菌），实验流程如下：

样品处理：取各地区纳豆25g，加入225mL无菌水制备1×10?1稀释菌悬液，梯度稀释至1×10??。

培养基选择：使用LB固体培养基（胰蛋白胨1.00g/100mL、酵母提取物0.50g/100mL、氯化钠1.00g/100mL、琼脂粉1.50g/100mL，pH7.2-7.4），121℃高压蒸汽灭菌15分钟。

接种与培养：采用稀释涂布平板法，取1×10??、1×10??、1×10??三个稀释度的菌悬液各0.1mL涂布，37℃倒置培养48小时。

筛选依据：选择直径较大、表面粗糙不透明、中心有黏液的典型菌落，镜检确认杆状形态及芽孢生成能力。

（二）诱变育种与高产菌株鉴定

为获得耐高温高产菌株，对筛选得到的野生型纳豆菌进行诱变处理：

诱变方法：将菌悬液经紫外线（20W，30cm距离）照射30秒，或用0.5%亚硝基胍处理15分钟。

筛选策略：在42℃高温条件下培养，通过透明圈法筛选蛋白酶活性增强的菌株——在含脱脂奶粉的培养基上，高产菌株会因蛋白酶分解蛋白质产生明显透明圈。

分子鉴定：对候选菌株进行16SrDNA测序，与GenBank中枯草芽孢杆菌标准序列（登录号：MN123456）比对，相似度≥99