肝素含量测定法.docVIP

附录ⅨP肝素含量测定法

(凝固法)

本法系依据硫酸鱼精蛋白能中和抗凝剂肝素，从而影响血浆凝固时间的原理，测定供试品中肝素含量。

试剂（1）缺血小板人血浆无菌采集人全血于3.8%枸橼酸钠抗凝剂（9∶1)中，混匀，以每分钟1500转在4℃离心30分钟，用塑料注射器取上层2/3的血浆，以每分钟3500转在4℃离心30分钟，取上层2/3血浆，分装于塑料管中，每支3ml，保存

（2）三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液（pH7.5）取三羟甲基氨基甲烷7.27g、氯化钠5.

（3）脑磷脂混悬液冻干脑磷脂加水复溶，取适量，用生理氯化钠溶液稀释，稀释后的脑磷脂混悬液应使空白凝固时间在200～300秒。

（4）0.025mol/L氯化钙溶液取氯化钙(CaCl2·2H2O)147g溶于1000ml水中,制成1mol/L氯化钙贮备液。临用时,用水将1mol/L氯化钙贮备液稀释40倍。

（5）硫酸鱼精蛋白溶液取硫酸鱼精蛋白适量，用pH7.5Tris缓冲液溶解并稀释成每1ml含1～20mg的溶液。

供试品溶液的制备于每支含不同浓度的硫酸鱼精蛋白溶液10μl的塑料管中,分别加入按标示量复溶后的供试品0.5ml，混匀。

测定法在已含有缺血小板人血浆0.1ml的塑料管中，加入脑磷脂混悬液0.1ml，混匀，37℃放置1分钟,加供试品溶液0.1ml、已