基因编辑与细胞培养手册.docx

基因编辑与细胞培养手册

第1章基因编辑原理与工具选择

第一节CRISPR-Cas9系统机制解析

CRISPR-Cas9系统是一种基于细菌免疫系统改造而来的人工基因编辑工具，其核心机制是利用一段人工设计的向导RNA（gRNA）引导Cas9核酸酶在基因组特定位点切割DNA双螺旋结构。当gRNA与靶序列通过碱基互补配对结合时，Cas9酶会识别并结合该位点，随后在PAM序列（通常为NGG）下游的特定位置产生双链断裂（DSB），从而启动细胞自身的修复机制。在细胞培养环境中，Cas9蛋白需要特定的辅助因子才能发挥功能，其中最关键的是Cas9的伴侣蛋白RNP