转录水平检测甲胎蛋白.pptxVIP

分子生物学第四次讨论;甲胎蛋白基因(alpha-fetoprotein，AFP)(GenBank登录号:NM_001134.1)的异常表达与肝癌、前列腺癌等恶性肿瘤有关，请根据基因表达的检测方法，设计实验方案从转录水平检测AFP的表达情况。实验方案包括：实验目的、实验方法及原理、技术路线、可能的结果分析及应用等。

;甲胎蛋白是人胚胎期血清中的主要蛋白成分。甲胎蛋白是一种糖蛋白，正常情况下，这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞，在胎儿13周AFP含量占血浆蛋白总量的1/3，胎儿出生后约两周甲胎蛋白从血液中消失。在妊娠30周达最高峰，以后逐渐下降，出生时血浆中浓度为高峰期的1%左右，约40mg/L，在周岁时接近成人水平。正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克/升，如在成人血清中含量过高，则提示有肝癌的可能。

;1、掌握RT－PCR技术、northern印记杂交的原理和方法

2、了解实验的操作方法和步骤

3、判断基因在转录水平的表达情况

;使用细胞RNA提取技术，然后通过逆转录合成cDNA，PCR扩增，利用琼脂糖凝胶电泳技术，测定AFPmRNA的表达。

逆转录PCR，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板经反转录酶或随机引物的作用从RNA合成cD