考马斯亮蓝法测定蛋白浓度实用技巧.pptxVIP

蛋白质是细胞中最主要的含氮生物大分子之一，承担着各种生物功效。蛋白质的定量分析是蛋白质结构分析的基础，也是农牧产品品质分析、食品营养价值比较、生化育种、临床诊疗等的主要手段。依据蛋白质的理化性质，提出各种蛋白质定量方法。考马斯亮蓝G－250法是比色法与色素法相结合的复合方法，简便快捷，灵敏度高，稳定性好，是一种较好的常用方法。通过本试验学习考马斯亮蓝G－250法测定蛋白质含量的原理，了解分光光度计的结构、原理和在比色法中的应用。试验四、蛋白质浓度测定（考马斯亮蓝结合法）一、试验目标：第1页

考马斯亮蓝G－250是一种染料，在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色。蛋白质含量在0～1000μg范围内，蛋白质一色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法测定。考马斯亮蓝G-250（CoomassiebrilliantblueG-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达成平衡，完毕反应十分快速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配