第三章-酶的分离纯化.pptVIP

第四章

酶的提取和分离纯化吴学玲分离纯化

（separationandpurification）是指将酶从细胞或培养基中取出，再与杂质分开，而获得与使用目的相适应的有一定纯度的酶产品的过程。分离纯化的目的1、为了研究酶的理化特性(包括结构与功能，生物学作用等)，对酶进行鉴定，必须用纯酶。2、作为生化试剂及用作药物的酶，常常也要求有较高的纯度。根据酶在体内的部位，分为胞内酶和胞外酶两大类。胞外酶易于分离。如收集动物胰液即可分离出其中的各种蛋白酶及酯酶等。胞内酶存在于细胞内，必须破碎细胞才能分离。酶的分离纯化应注意的问题一、防止酶变性失效1、低温操作2、避免过酸过碱3减少泡沫形成4、避免重金属、有机溶剂、微生物污染、蛋白水解酶等破坏分解酶二、选择有效的纯化方法酶与其底物和抑制剂具有高亲和性，因此可使用各种亲和分离法；而且，当这些物质存在时，酶的理化性质和稳定性往往会发生一些有利的变化，这样又扩大了纯化方法与纯化条件的选择范围。3、酶活性测定贯穿纯化过程的始终酶活性测定贯穿纯化过程的始终。通过检测酶活性可以跟踪酶的来龙去脉，为酶的抽提、纯化、以及选择制剂过程中的正确方法条件提供直接依据。第一节细胞破碎选择酶含量高、易于分离的动植物细胞或微生物材料作原料。把蛋白质或酶从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并