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2025年临床医学基本操作与规范指南

第1章临床微生物学检验操作规范

1.1细菌培养与分离技术

无菌操作是细菌培养成功的前提，需严格遵循“无菌技术原则”，将双手在75%酒精棉球上擦拭消毒，确保操作台面、移液枪头及培养皿均无杂菌污染。接种前务必对接种环或接种针进行灼烧灭菌，火焰高度控制在距样品表面约1-2毫米处，待火焰自然熄灭后，迅速将接种环伸入样品中取菌，再立即伸入无菌培养皿内壁冷却。

取菌量需精确控制，通常使用无菌采血管或棉签蘸取样品，利用毛细作用将菌液吸至试管底部，避免混入空气导致培养皿内形成气泡影响观察。接种后需立即倒置培养，瓶口朝下以防冷凝水滴落污染培养基表面，并在培养箱中设定37℃±1℃、5%CO?环境培养16-24小时。观察培养结果时，需区分“阳性”与“阴性”：阳性菌落应呈单一菌落形态，边缘整齐，大小一致，而阴性背景应清晰，无杂菌生长干扰。

若培养24小时后仍无生长，需延长至48小时或72小时，并检查培养箱温度是否稳定，必要时更换新鲜培养基重做实验。

1.2真菌培养与鉴定方法

真菌培养基需预先在180℃烘箱中灭菌12-15小时，冷却至50℃以下方可接种，以防高温杀死真菌孢子导致培养失败。采集真菌标本时，若为口腔或皮肤样本，需使用无菌棉拭子轻轻拭取，严禁用力过猛以免损伤表皮导致细菌污染，拭子尖端需垂直压入角质层。