细胞培养研究技术.pptxVIP

第四章细胞培养研究技术

主讲人：高云副教授

;基本操作技术和要求;培养室内的无菌技术;培养细胞的取材;皮肤和粘膜的取材;内脏和实体瘤的取材;血细胞的取材;鼠胚组织的取材;组织材料的分离;细胞悬液的分离方法;机械分散法

;消化分离法;胰蛋白酶法;胶原酶法;消化分离法;胰蛋白酶法;胶原酶法;EDTA法;第一节细胞的分离和纯化;一、成纤维型细胞的分离和去除;成纤维细胞样细胞;生长特点

排列成放射状，漩涡状

并不紧靠连成片，

细胞—细胞接触易断开而

单独行动

游离的单独的成纤维样细胞，

常有几个伸长的细胞突起

;（一）差速贴壁分离法;例1;培养细胞活力测定

;2台盼蓝法

;3四唑盐（MTT）比色法

;操作步骤

（1）单细胞悬液接种于96孔培养板；103-104细胞/孔，每孔培养基总量200微升（96孔培养板每孔容积370微升），37℃、5％

CO2培养箱中培养一段时间（根据实验目的决定培养时间）

（2）加入2毫克／毫升的MTT液（50微升／孔）；继续培养3小时。

（3）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（150微升／孔），将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟，使结晶物溶解。

（4）酶标仪检测各孔OD值（检测波长570纳米）。记录结果，绘制

;谢谢大家！