双向电泳技术a.ppt

双向电泳;高分辨的双向电泳是由O’Farrell’s和Klose三十多年前各自创建的。1975年O’Farrell’s对E.coli提取物进行双向电泳后，成功地分离约1000个E.coli蛋白，从此拉开了双向电泳在蛋白组学中的研究序幕。;双向电泳其原理简明，第一向沿水平方向按等电点不同进行分离（等电聚焦），不同等电点的蛋白质沿pH梯度分离，到达各自的等电点；随后第二向沿垂直的方向按分子量进行分离，它是目前蛋白质组学研究的核心技术。;;（一）等电聚焦电泳技术

（isoelectricfocusing，IEF）;1、等电聚焦原理;+;2、优点;3、pH梯度的形成;（2）天然pH梯度：

;pH梯度的选择;4、两性电解质载体与支持介质;1）两性电解质介质

理想的两性电解质载体应在pI处有足够的缓冲能力及电导，前者保证pH梯度的稳定，后者允许一定的电流通过。不同pI的两性电解质应有相似的电导系数从而使整个体系的电导均匀。两性电解质的分子量要小，易于应用分子筛或透析方法将其与被分离的高分子物质分开，而且不应与被分离物质发生反应或使之变性。;2）常用的支持载体

聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶等，其中聚丙烯酰胺凝胶为最为常用。;电泳后，不可用染色剂直接染色，因为常用的蛋白质染色剂也能和两性电解