激光扫描共聚焦显微镜.pptVIP

激光扫描共聚焦显微镜;FluorescentMicroscope;;电子显微镜的缺点：

1.由于样品需要固定,观测活细胞十分困难.

2.样品制备过程（固定、包埋、切片）造成的假象

荧光显微镜的缺点:

1.无法实现对荧光,透射光的同时采集,无法实现多荧光的同时采集

2.荧光散射光太强，造成实际分辨率的大大下降。

3.荧光漂白很快，使荧光图像的拍照有困难。

4.无法对样品进行断层扫描,完成3D的工作.

5.对于信号较弱的样本,无法提高观察的灵敏度.

6.可以观查活细胞或组织但细胞或组织内结构高度重叠

;激光共聚焦显微镜的应用;时间分辨和快速扫描动态图像;;Hela

green-中心体

red-纺锤体;二.光学切片和三维重组

光学切片和三维重组:LSCM通过薄层光学切片功能，可获得标本真正意义上的三维数据，经计算机图像处理及三维重建软件，产生生动逼真的三维效果，可进行形态学观察，并揭示亚细胞结构的空间关系，用以阐明三维结构与组织功能之间的关系。;显微CT与三维重组;3Dreconstruction;三.动态测量

游离Ca2+,Mg2+、K+、Na+测量

pH值的检测

;相对测量

程序化测量：用timelapse中的编程按钮可进行不同时间

序列的扫描测量

?F/F=(F-Fbase)/(Fbase-FBG)