一种基于HDR-CRISPR_Cas9技术快速构建重组鸭肠炎病毒的方法的建立.pdfVIP

畜牧兽医2025,52(1):298309

中国

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一种基于HDR-CRISPR/Cas9技术快速构建

重组鸭肠炎病毒的方法的建立

贾文凤12，蒋香香²，陶慧丽²，王安平12，吴植1，2，朱善元1，2区

（1.江苏农牧科技职业学院，江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心，

泰州225300;2.江苏农牧科技职业学院，泰州225300）

摘要：【目的】本研究通过优化试验条件，建立基于HDRCRISPR/Cas9基因编辑技术快速、准确地将外源基因

定向插人鸭肠炎病毒(Duckcntcritisvirus,DEV)基因组的方法，为以DEV为载体的重组疫苗的研制奠定基础。

【方法】分离并扩繁DEV疫苗株，测定其病毒滴度，根据DEV疫苗株UL26、UL27基因间非编码区序列,设计合成

向导RNA（gRNA），经双链退火获得目的片段，通过基因克隆技术将其插人PX459V2.0载体获得gRNA（as9质

粒。同时，通过常规基因克隆技术将增强型绿色荧光蛋白（