抗酸染色（齐-尼 Ziehl-Neelsen 法，经典结核杆菌染色）.docxVIP

抗酸染色（齐-尼Ziehl-Neelsen法，经典结核杆菌染色）

一、原理

结核分枝杆菌等抗酸杆菌细胞壁含大量分枝菌酸，石炭酸复红加温后可穿透细胞壁牢固结合；盐酸酒精无法脱色，菌体呈红色；其他细菌/细胞被亚甲蓝复染成蓝色。

二、试剂配制

石炭酸复红染液（初染液）

碱性复红1g+95%乙醇10mL溶解；加5%石炭酸水溶液90mL，混匀过滤。

3%盐酸酒精（脱色液）

浓盐酸3mL+95%乙醇97mL。

吕氏亚甲蓝复染液

亚甲蓝0.3g+95%乙醇30mL；加0.01%KOH水溶液100mL。

三、标本制备（痰/脓液/组织）

痰标本：取干酪样、脓样痰少许，均匀薄涂于洁净玻片中央，直径1cm薄膜。

组织/体液：离心取沉淀物涂片。

干燥：室温自然风干。

固定：玻片涂片面向上，酒精灯外焰快速过3～4次，手触背面温热即可，避免烤焦。

四、标准操作步骤（热染法）

初染

玻片平放，滴满石炭酸复红，酒精灯在玻片下方温和加热至出现蒸汽，持续5min，期间补染液防止干涸；冷却后流水轻洗。

脱色

滴加3%盐酸酒精，轻轻晃动玻片，直至流出液体无红色（约30s～1min），立即流水冲洗。

复染

滴吕氏亚甲蓝染1min，水洗。

干燥镜检

直立晾干或吸水纸轻吸，油镜（100×）观察。

五、快速冷染法（无需加热，临床常用）

石炭酸