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抗菌药物敏感性试验（药敏试验）完整标准流程

一、试验前准备

1.标本接收与核查

核对标本信息：患者姓名、住院号、标本类型（血、痰、尿、脓液、脑脊液等）、采集时间、临床诊断。

标本质量判定：

不合格标本（唾液污染痰、久置干标本、容器渗漏、量不足）退回重采；

合格标本立即处理，室温放置不超过2h。

标本分检：直接涂片镜检+分离培养同步进行。

2.试剂与耗材准备

培养基：MH琼脂（细菌药敏金标准）、血MH（链球菌、嗜血菌）、HTM（流感嗜血杆菌）；

药敏纸片/微量肉汤稀释板、0.5麦氏浊度标准管、无菌生理盐水、接种环、比浊仪；

质控菌株：ATCC25922大肠埃希菌、ATCC25923金黄色葡萄球菌、ATCC27853铜绿假单胞菌等。

3.纯培养菌株获取

标本接种相应平板，35℃孵育16～24h；苛养菌（链球菌、流感嗜血杆菌）5%CO?环境培养。

挑取单一纯菌落，排除混合杂菌；若平板多种菌落，分纯后分别做药敏。

涂片革兰染色初步鉴定菌种，预判抗菌药选择范围。

二、菌悬液制备（关键步骤，浓度直接影响结果）

挑取3～5个相同纯菌落，加入无菌生理盐水/肉汤乳化；

比浊仪调节浊度至0.5麦氏标准（约1.5×10?CFU/mL）；

制备后15min内完成接种，放置过久菌体沉降，浓度偏低。

三、药敏试验操作（3种主流方法）

方法1：纸片扩散法（