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8-羟基脱氧鸟苷含量实验测定方法

8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）是活性氧自由基攻击DNA中鸟嘌呤碱基形成的主要氧化损伤产物，其含量水平可直接反映机体的氧化应激状态，在肿瘤、心血管疾病、神经退行性疾病等多种疾病的发病机制研究、早期诊断及疗效评估中具有重要意义。准确测定生物样本中8-OHdG的含量，是开展相关研究的关键环节。目前，8-OHdG的测定方法主要包括色谱法、免疫分析法、电化学分析法及毛细管电泳法等，不同方法在灵敏度、特异性、操作复杂度及适用样本类型等方面各有优劣，研究者需根据实验需求合理选择。

一、色谱法

色谱法是基于物质在固定相和流动相之间分配系数的差异实现分离分析的方法，在8-OHdG测定中应用广泛，主要包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）及液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）。

（一）高效液相色谱法（HPLC）

HPLC是测定8-OHdG的经典方法，其原理是利用8-OHdG与其他DNA碱基或代谢产物在色谱柱上保留时间的差异进行分离，再通过紫外检测器（UV）、荧光检测器（FD）或电化学检测器（ECD）进行定量分析。

操作流程：首先对生物样本进行前处理，常见样本包括血液、尿液、组织等。以尿液样本为例，需先进行离心去除杂质，然后通过固相萃取（SPE）或液液萃取（LLE）富集8-OHdG；对于组织样本，需先进行匀浆，再采用蛋白酶K消化、酚-氯