10亲和层析纯化胰酶完整操作指南.pdfVIP

实验14亲和层析纯化胰酶

一、原理

载体活化即使载体具有与配基进行反应生成共价偶联物的性质其方法根据固相载体的性质而定琼脂糖葡聚糖或纤维素活化最常用的方法是溴化氰法此外也可以用均二氯三嗪或三氯三嗪高碘酸盐环氧乙烷等方法活化了的固相载体与配基偶联便可得到亲和吸附剂适合亲和层析法

在制备胰蛋白酶过程中，往往混杂着与胰蛋白酶相近似的蛋白水解酶，如胰

凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。由于三者在物理化学性质和结构上均十分接近，利用一

般常用的提取分离方法，很难将它们之间彼此彻底分开。为了获得高纯度的胰蛋白

酶制品，采用亲和层析技术进一步纯化后、可达到十分满意的效果。

生物大分子化合物的重要特征之一是具有与某些相对应的分子通过次级键或

共价键专一结合的能力即亲和力。例如酶与抑制剂之间，抗原与抗体之间，结合的

双方不仅是专一的，而且结合以后可以在不丧失生物活性的基础上用物理或化学的

方法进行解离。根据这一特性，如果把具有亲和力的一对分子的某一方连接于水不

溶的固相载体上作为固定相，那么另一方随着流动相流经该固定相时，双方便亲和

量当胰蛋白酶峰洗出待紫外吸收回到基线后重新用缓冲液平衡亲和层析柱可以反复使用四实验结果蛋白蛋白OD值蛋白OD值酶活